兩種微束分析技術在法醫(yī)學溺死診斷中的應用研究.pdf

1、在法醫(yī)學領域，水中腐敗尸體的溺死診斷是最大的難題之一。在眾多溺死診斷的方法中，硅藻檢驗一直以來被公認為最佳方法。硅藻檢驗中，強酸消解法由于具有組織消解時間短、消解完全、程序簡單、成本低等優(yōu)點，在法醫(yī)學實踐中應用最為廣泛。而對于臟器組織中硅藻的檢測，光學顯微鏡法由于成本低、制樣方便，一直是最主要的檢測手段。然而傳統(tǒng)的強酸消解—光學顯微鏡法存在硅藻檢測靈敏度低、工作強度高、強酸消解對操作者和實驗室具有化學危險性而且污染環(huán)境等缺點。

2、掃描電鏡能譜分析(SEM/EDX)技術因為具備微觀形貌觀察和成份分析能力、分析速度快、無破壞性而成為法庭科學領域中的一種強大的工具。近年來出現了一種新型微區(qū)分析技術—微束X射線熒光光譜分析(Micro—XRF)，其元素檢測靈敏度是掃描電鏡能譜分析100～1000倍，分析深度大而且樣品制備簡單，因而在法庭科學領域顯示出廣闊的應用前景。 本文采用SEM/EDX和Micro—XRF這兩種現代微束分析技術對法醫(yī)學溺死診斷問題進行深入研究

3、，旨在建立安全、快速、靈敏度高、環(huán)境友好的溺死診斷方法，并為法醫(yī)學溺死珍斷積累基礎數據。 建立了一種基于微波消解和真空抽濾前處理技術的自動化掃描電鏡檢測臟器內硅藻的新方法—MD—VF—Auto SEM法。研究表明：采用MD—VF—Auto SEM法從溺死實驗兔各臟器組織中檢出硅藻的比例和檢測含量均高于基于傳統(tǒng)硝酸乙醇法消解、離心處理、自動化掃描電鏡檢測法(傳統(tǒng)處理法)(P<0.01)，兩種方法從肺及內部器官組織(肝或腎或股骨骨髓

4、)中均檢出硅藻的陽性比例分別為86.7％和66.7％，因此MD—VF—Auto SEM法具有更高的檢測靈敏度，此外研究亦表明MD—VF—Auto SEM法能有效避免污染，具有簡單、高效、環(huán)保、定性定量分析準確，該方法大大改善了法醫(yī)學硅藻檢驗技術人員的工作環(huán)境、降低了勞動強度。研制了一種實用的多聯真空抽濾裝置，使MD—VF—Auto SEM法更具高效性。MD—VF—Auto SEM法在實際案件中的應用效果顯示了其在法醫(yī)學溺死診斷實踐中具有

5、良好的應用前景。首次提出自動化定性定量分析臟器組織內硅藻的設想和技術路線。所建立的MD—VF—Auto SEM法，在發(fā)展法醫(yī)學自動化硅藻檢驗技術方面邁出了第一步。 動物實驗結果顯示，溺死實驗兔肺臟中硅藻種類及每種硅藻的相對數量均與溺液一致，表明臟器內的硅藻分布與溺死地點水樣密切相關。因此通過連續(xù)監(jiān)測水中的硅藻變化建立硅藻的分布規(guī)律將對溺死診斷和溺死地點的推斷有幫助。針對作者所在單位的工作實際，對珠江廣州市區(qū)段水中的硅藻分布進行初

6、步調查，建立了珠江廣州市區(qū)段9月份、12月份的硅藻分布規(guī)律：珠江廣州市區(qū)段屬富營養(yǎng)型水體，兩個月份的硅藻含量均在10000個/mL以上；其中直鏈藻和小環(huán)藻為水中的優(yōu)勢種(兩個屬的硅藻數量之和占所有硅藻總數的85％以上)；大部分直鏈藻大小為40-200μ m，、小環(huán)藻直徑為5-20μ m；由西往東，硅藻數量呈逐漸減少的趨勢：同一地點，9月份的硅藻數量均高于12月份；9月直鏈藻數量多于小環(huán)藻，而12月直鏈藻數量少于小環(huán)藻。9月份和12月份，

7、不同地點的這兩種優(yōu)勢種比例分別在1.5～2.0和0.1～0.9之間波動。由于同一月份珠江廣州市區(qū)段不同位置硅藻種類分布出現波動性變化，對于溺死于該范圍的尸體，難以根據肺臟內硅藻檢驗結果對溺死地點進行準確的推斷。 由于硅藻在一些實際溺死尸體肝、腎、骨髓等臟器組織中含量很低甚至為陰性，而且某些水體不含硅藻，這些因素影響了硅藻檢驗在溺死診斷中的應用。通過SEM/EDX分析實驗動物和實際案例中的人體尸體臟器切面上的異物顆粒，對其作為一種

8、溺死診斷指標的可行性進行了探討。研究表明：溺死實驗兔和實際溺死尸體肺臟切面大多能檢出含鎂、硅、鋁、鈣、鐵、鉻、錫、銅等元素成分的無機顆粒，部分還能檢出硅藻和來源于動物本身的毛發(fā)，溺死組實驗兔和人體尸體肺臟切面異物顆粒的檢出率分別為75％和100％，非溺死組實驗兔和人體尸體肺臟切面均未檢出異物顆粒。因此肺臟切面的異物顆?？勺鳛橐环N溺死診斷的指標：研究中采用的切面直接分析法和導電膠粘取法不能適用于腐敗尸體的法醫(yī)學溺死診斷，而且檢測靈敏度低，

9、可能限制該法在肝、腎等其它臟器分析中的應用。 采用Micro—XRF對實驗動物肺臟內的抗酸性硅質顆粒進行研究。研究表明：溺死組和死后入水組實驗兔肺臟內抗酸性硅質異物顆粒面積含量有顯著性差異(P<0.01)，溺死組實驗兔肺臟內抗酸性異物顆粒面積含量是死后入水組的10倍以上，因此肺臟內抗酸性硅質異物顆粒可作為一種溺死診斷的指標?；谖⒉ㄏ狻婵粘闉V前處理技術的Micro—XRF法檢測肺臟內的異物顆粒具有環(huán)境友好、分析速度快、靈敏度