DNA分析在法醫(yī)學(xué)種屬鑒定中的應(yīng)用研究.pdf

1、種屬鑒定(species identification)在法醫(yī)學(xué)中占有重要的地位，其主要任務(wù)是鑒定法醫(yī)學(xué)生物性檢材的種屬來(lái)源，確定檢材是否來(lái)自人體，必要時(shí)還需要確定檢材來(lái)自何種動(dòng)物。種屬鑒定采用的方法主要有三類(lèi)，即形態(tài)學(xué)方法、血清學(xué)方法和DNA技術(shù)檢測(cè)方法。與蛋白質(zhì)相比，DNA分子相對(duì)穩(wěn)定、特異，所以DNA分析方法有助于對(duì)微量、降解和腐敗檢材的鑒定。利用DNA分析進(jìn)行種屬鑒定是目前法醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。目的本課題旨在研究17個(gè)新的STR基因

2、座和腫瘤抑制基因TP53第八內(nèi)含子的種屬特異性；建立mtDNA細(xì)胞色素b(cyt 6)基因PCR-RFLP分析以及復(fù)合擴(kuò)增mtDNA--HV Ⅰ、HVⅡ和cyt b片段進(jìn)行法醫(yī)學(xué)種屬鑒定的方法。研究上述方法在種屬鑒定中的價(jià)值和可行性。方法以人和十七種常見(jiàn)動(dòng)物為研究對(duì)象，提取DNA定量后。(1)分別擴(kuò)增17個(gè)STR基因座和TP53第八內(nèi)含子，聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染檢測(cè)，分析各基因座和TP53第八內(nèi)含子的種屬特異性。(2)擴(kuò)增cyt 6基

3、因，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的有無(wú)初步區(qū)分部分動(dòng)物，對(duì)于有擴(kuò)增產(chǎn)物的動(dòng)物，選擇限制性?xún)?nèi)切酶(Alu Ⅰ)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物酶切，分析酶切產(chǎn)物，進(jìn)行種屬鑒定。(3)復(fù)合擴(kuò)增mtDNA-HV Ⅰ、HV Ⅱ和cyt b片段，PAGE、銀染顯色后分析結(jié)果。結(jié)果(1)D9S1118和D20S604基因座對(duì)各動(dòng)物DNA均無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物；DXS101、DYS391和D20S161基因座只對(duì)猴DNA有擴(kuò)增產(chǎn)物；D2S1774基因座對(duì)猴和鼠DNA有擴(kuò)增產(chǎn)物； D21S1

4、409、DXS6809和DYS393基因座對(duì)猴、豚鼠、鼠和蛙DNA有擴(kuò)增產(chǎn)物，對(duì)其他動(dòng)物DNA無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物或擴(kuò)增產(chǎn)物在人類(lèi)等位基因分型區(qū)外；DYS390、DXS6789、DXS9894、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座對(duì)多種動(dòng)物DNA均有擴(kuò)增產(chǎn)物，片段多位于人類(lèi)等位基因分型區(qū)內(nèi)。(2)TP53第八內(nèi)含子對(duì)人和猴的DNA都擴(kuò)增出一條長(zhǎng)度為460bp的片段；對(duì)其他動(dòng)物雖有擴(kuò)增產(chǎn)物，但片段長(zhǎng)

5、度和人有差異；雞、狗的DNA未見(jiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物。(3)擴(kuò)增cyt b基因在牛、豬、羊、貓、猴、兔、豚鼠、鼠、鱔及人mtDNA檢出981 bp擴(kuò)增產(chǎn)物；對(duì)狗mtDNA有微弱的非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；對(duì)雞、蛙、鴨、魚(yú)和馬mtDNA無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。經(jīng)Alu I消化后，牛和豬的擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生三條帶；羊的擴(kuò)增產(chǎn)物小部分被酶切；貓的擴(kuò)增產(chǎn)物原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約600 bp的片段；猴的擴(kuò)增產(chǎn)物原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約800 bp的片

6、段；兔的原981 bp片段被完全酶切，獲得一條約900 bp的片段；豚鼠原981 bp片段未被完全酶切，但獲得較多小的片段；鼠的原981 bp片段被完全酶切，獲得兩條約400 bp和550 bp的片段；鱔及人的擴(kuò)增產(chǎn)物無(wú)明顯變化。(4)復(fù)合擴(kuò)增mtDNA-HV I、HVⅡ和cyt b片段在人mtDNA表現(xiàn)為278bp、425bp、358bp三條帶，動(dòng)物為一條帶，在電泳譜中位置與人358bp的條帶存在差異。結(jié)論(1)D9SIll8和D20

7、S604基因座種屬特異性好；DXSIOI、DYS391、D20S161、D2S1774、D21S1409、DXS6809和DYS393基因座對(duì)少數(shù)動(dòng)物有擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物多位于人等位基因分型區(qū)外，種屬特異性較好，法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中可用于檢材的種屬來(lái)源分析；DXS9894、DYS390、DXS6789、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座種屬特異性差。(2)擴(kuò)增cyt b基因，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的有無(wú)