DNA-RNA同步提取方法學(xué)的建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、目的:
　　 為了更好的確定微量生物檢材的個(gè)體來(lái)源和組織來(lái)源，本課題旨在建立一種用Trizol試劑對(duì)法庭科學(xué)中同一生物檢材同步提取DNA/RNA的新方法;用建立的方法對(duì)五種法醫(yī)相關(guān)體液DNA進(jìn)行檢測(cè)，以進(jìn)一步驗(yàn)證所建立方法的有效性;并探索建立這五種體液的特異性mRNA復(fù)合擴(kuò)增體系。
　　 方法:
　　 制備同一個(gè)體的外周血FTA卡樣本20份，每份含10μL外周血。分為兩組:普通Trizol法組，按照Trizol試

2、劑說(shuō)明書(shū)對(duì)樣本DNA進(jìn)行提取;改良Trizol法組，通過(guò)改變普通Trizol法收集水相總RNA后余下的中間層和有機(jī)相的pH，用乙醇沉淀當(dāng)中的DNA，然后用Promega DNA IQTM試劑盒純化。檢測(cè)兩種方法提取DNA的純度和濃度，并以之為模板進(jìn)行終點(diǎn)PCR和STR檢測(cè)，比較兩種方法提取DNA的純度、濃度及STR分型;兩種方法總RNA的提取均按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，使用本課題組成員前期所建立的方法檢測(cè)RNA的提取效果;利用所建立的改良Tr

3、izol法對(duì)外周血、唾液、精液、陰道分泌物、月經(jīng)血DNA/RNA進(jìn)行提取，檢測(cè)提取DNA的STR分型;選取擴(kuò)增條件相同的9對(duì)引物，包括7對(duì)以上五種體液的特異性mRNA引物和2對(duì)管家基因的引物，并根據(jù)片段大小對(duì)引物標(biāo)記不同熒光，初步建立同一生物檢材的mRNA復(fù)合RT-PCR體系，用毛細(xì)管凝膠電泳法對(duì)mRNA逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1改良Trizol法可以對(duì)同一檢材的DNA/RNA進(jìn)行同步提取。

4、　　 2改良Trizol法提取的10μL外周血DNA純度為1.470±0.065，濃度為1.498+0.297ng/μL。普通Trizol法提取的基因組DNA純度為1.301+0.065，濃度為0.618±0.209 ng/μL。擴(kuò)增STR分型均良好。RNA提取效果良好。
　　 3改良Trizol法提取外周血、唾液、精液、陰道分泌物、月經(jīng)血DNA均可獲得良好的STR分型。
　　 4利用9對(duì)引物建立的五種復(fù)合擴(kuò)增體系所得