miR-133b在多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　多囊卵巢綜合征目前已經(jīng)成為研究女性不孕的熱點(diǎn)，已有研究表明microRNAs在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。研究miR-133b在PCOS大鼠模型卵巢中的表達(dá)、對(duì)大鼠生育能力及子代鼠表型的影響，探討miR-133b在多囊卵巢綜合征發(fā)病中的作用及相關(guān)機(jī)制，并進(jìn)一步探討PCOS是否具有遺傳傾向。
　　方法：
　?。?）來(lái)曲唑誘導(dǎo)PCOS大鼠動(dòng)物模型，分別用miR-133b agomir和miR-133b anta

2、gomir干預(yù)PCOS大鼠模型，觀察PCOS疾病狀態(tài)下、經(jīng)過(guò)干預(yù)后大鼠外周血血清激素水平與卵巢組織學(xué)改變以及靶基因TAGLN2表達(dá)水平。
　?。?）與雄鼠合籠，記錄每組大鼠的妊娠情況，計(jì)算妊娠率。
　　（3）子鼠養(yǎng)到6周后處死，觀察子代鼠的卵巢組織學(xué)改變，miR-133b及靶基因TAGLN2的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　?。?）光學(xué)顯微鏡下觀察，相對(duì)于對(duì)照組，PCOS組母代大鼠卵巢卵泡多呈囊性擴(kuò)張，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少

3、，少見各級(jí)發(fā)育期卵泡及黃體，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，卵巢正常結(jié)構(gòu)破壞。PM組母代大鼠卵巢內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體，多數(shù)卵泡為初級(jí)卵泡，顆粒細(xì)胞層排列整齊，偶可見擴(kuò)張的囊性卵泡，卵巢結(jié)構(gòu)趨于正常。PI組母代大鼠卵巢內(nèi)卵泡多呈囊性擴(kuò)張，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，少見各級(jí)發(fā)育期卵泡。
　?。?）PCOS組母代大鼠血清T水平明顯高于其余三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而PM組母代大鼠血清T水平顯著低于PCOS組，而與對(duì)照組相比

4、無(wú)明顯差異。PCOS組母代大鼠血清LH水平、LH/FSH水平顯著高于對(duì)照組，PM組顯著低于PCOS組，而與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PCOS組母代大鼠血清E2水平低于其余三組。PCOS組母代大鼠血清INS水平高于其余三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）Real-time PCR顯示相對(duì)于對(duì)照組，PCOS組母代大鼠卵巢內(nèi)miR-133b水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），PM組母代大鼠

5、卵巢內(nèi)miR-133b水平比 PCOS組明顯增加，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P＞0.05)。PI組大鼠的miR-133b水平也顯著性低于對(duì)照組（P＜0.01）。PCOS組TAGLN2的表達(dá)水平顯著性低于對(duì)照組（P＜0.01）。
　?。?）Western blot顯示與對(duì)照組相比，PCOS組母代大鼠卵巢中的TAGLN2表達(dá)水平顯著減少（P＜0.01）。PM組大鼠的卵巢中TAGLN2的表達(dá)水平比PCOS組升高，與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義。PI組其卵巢中的TAGLN2的表達(dá)水平也顯著降低（P＜0.01）。
　?。?）經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，PCOS組母代大鼠的妊娠率顯著低于對(duì)照組（33.33％vs100%，P＜0.01），而PM組的妊娠率高于PCOS組，與對(duì)照組無(wú)明顯差異（83.33%vs100%，P＞0.05)。PI組大鼠的妊娠率明顯低于對(duì)照組（33.33%vs100%，P＜0.01)。
　?。?）對(duì)照組子代大鼠卵巢皮質(zhì)內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體，成熟卵泡內(nèi)

7、卵母細(xì)胞透明帶明顯，多層顆粒細(xì)胞排列整齊，卵巢組織學(xué)形態(tài)正常；PCOS組子代大鼠卵巢內(nèi)可見到多個(gè)擴(kuò)張的卵泡，卵母細(xì)胞少見或缺如，顆粒細(xì)胞層減少，少見各級(jí)發(fā)育期的卵泡，可見少數(shù)黃體；PM組子代大鼠卵巢內(nèi)可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體，顆粒細(xì)胞層排列整齊，擴(kuò)張性卵泡少見；PI組子代大鼠卵巢皮質(zhì)內(nèi)擴(kuò)張的卵泡少見，可見不同發(fā)育時(shí)期的卵泡及黃體。
　?。?）PI組子代大鼠血清 T水平明顯高于其余三組（P＜0.05）PM、PI組子代大鼠血清 F

8、SH水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。PI組子代大鼠血清LH、LH/FSH水平高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。PCOS組、PM組、PI組子代大鼠血清E2水平均低于對(duì)照組，除PCOS組外，其余兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。PI組子代大鼠血清INS水平低于其余三組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?。?）Real-time PCR顯示相對(duì)于對(duì)照組，PCOS子代組大鼠卵巢內(nèi)miR-133b水平顯著

9、升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。PM子代組、PI子代組miR-133b水平與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。PCOS子代鼠的TAGLN2表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05)。
　?。?）Western blot顯示與對(duì)照組相比，PCOS組子代大鼠卵巢中的TAGLN2表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。PM組大鼠的卵巢中TAGLN2的表達(dá)水平與對(duì)照組相比，顯著性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.

10、01)。PI組其卵巢中的TAGLN2的表達(dá)水平也顯著降低（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、來(lái)曲唑誘導(dǎo)SD大鼠PCOS模型方法可行，模型鼠的卵巢病理改變、血清性激素水平變化與PCOS患者臨床表型相同。
　　2、PCOS大鼠卵巢中miR-133b表達(dá)水平顯著性降低。
　　3、miR-133b可靶向調(diào)控TAGLN2的表達(dá)。增加miR-133b可上調(diào)TAGLN2的表達(dá)，改善PCOS大鼠的癥狀，增加妊娠率。