AR和TGF-β1在大鼠多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、多囊卵巢綜合征(Polycysticovariansyndrome，PCOS)是育齡婦女最常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病之一，以雄激素過多與持續(xù)不排卵為主要特征，發(fā)病率占不孕婦女的5％-21％，占不排卵婦女的75％-80％。該病是1935年Stein和Leventhal首先報道一組以閉經(jīng)、肥胖、多毛、不孕及雙側(cè)卵巢呈多囊性增大為主要表現(xiàn)的綜合征，因其病理生理學(xué)改變范圍非常廣泛，涉及遺傳、神經(jīng)內(nèi)分泌、糖代謝、脂肪代謝、蛋白質(zhì)代謝以及卵巢局部調(diào)控因

2、素等的異常變化，對其研究至今仍是婦科內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。卵巢局部高雄激素是導(dǎo)致PCOS的關(guān)鍵原因，因此對高雄激素形成這一特征性改變的研究成為闡明病因的關(guān)鍵，有研究表明，形成卵巢局部高雄激素的直接原因是卵巢局部調(diào)節(jié)因子的功能紊亂，其中雄激素受體(Androgenreceptor，AR)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)的作用不容忽視。 PCOS許多病理特征都受著AR的影響

3、。人AR基因位于X染色體，包含一個位于外顯子1的CAG重復(fù)序列。此CAG重復(fù)序列具有多態(tài)性，不同的CAG重復(fù)序列與雄激素敏感相關(guān)性病理過程有關(guān)，短AR-CAG序列與雄激素活性升高有關(guān)，長CAG序列與雄激素低活性有關(guān)。雄激素可以抑制TGF-β1與受體的結(jié)合，雄激素受體可通過TGF-Ⅰ型受體(TβR-Ⅰ)的直接作用底物Smad3而阻斷TGF-β的信號傳導(dǎo)路徑。 TGF-β超家族由至少30種細(xì)胞因子組成，根據(jù)這些因子的親緣關(guān)系，進(jìn)一步

4、劃分為亞家族[1]，包括TGF-β亞族(TGF-β1～6)、激動素(actiyin)、成骨蛋白(Bonemorphogeneticprotein，BMP)亞族等，其中TGF-β1是一種多功能細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)生長和各種類型細(xì)胞分化的作用，而且還具有抗炎和抑制免疫力的作用。卵巢內(nèi)的TGF-β1被認(rèn)為主要是在卵巢內(nèi)局部生成，起自分泌/旁分泌作用，不同大小卵泡內(nèi)TGF-β水平不同，在不同時期的子宮內(nèi)膜中TGF-β水平也不同，在月經(jīng)后期TGF-

5、β通過抑制內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增生、蔓延和轉(zhuǎn)移而促進(jìn)膠原的收縮性，從而保護(hù)內(nèi)膜以免形成廣泛的纖維化和瘢痕。上皮細(xì)胞來源的TGF-β1通過與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的相互作用，可導(dǎo)致基質(zhì)的蛻膜化。在胚胎種植的過程中，以及在胚胎分化誘導(dǎo)的過程中，TGF-β超家族的不同成員都可以促進(jìn)母體對胎兒移植物的耐受，增加子宮內(nèi)膜的敏感性，影響胚胎的種植。 本研究通過建立來曲唑所致PCOS大鼠模型，應(yīng)用WesternBlot方法觀察AR及TGF-β1在子宮內(nèi)膜

6、中的表達(dá)，從整體水平、分子水平綜合分析AR及TGF-β1在PCOS高雄激素血癥形成中的作用機(jī)制。 材料與方法1研究對象6周齡SD清潔級雌性大鼠60只，有4天的規(guī)律動情周期，由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：SYXK(豫)2005-0012，隨機(jī)分為實驗組20只，實驗對照組20只，空白對照組20只。 2實驗方法①PCOS模型的建立：實驗組灌胃服用來曲唑1mg/kg/日，溶于1％羧甲基纖維素(Carboxmethl

7、ycellulose，CMC)中，實驗對照組灌胃服用1％CMC，空白對照組不給以灌胃刺激。連續(xù)灌服21天，此期須每日監(jiān)測大鼠動情周期有無變化。 ②標(biāo)本采集：在最后一次應(yīng)用來曲唑24小時(并禁食12小時)后，缺血法致死，，取血5ml，2000r/min離心10min，收集血清，-40℃凍存?zhèn)溆茫环Q重子宮與卵巢并取出子宮內(nèi)膜，卵巢以其長徑將其剖開并固定于10％福爾馬林，子宮內(nèi)膜-80℃凍存?zhèn)溆谩?③卵巢組織學(xué)檢查：以卵巢最大

8、平面作為待檢平面行石蠟包埋，每個石蠟塊分別以4um厚度連續(xù)切片兩次(間隔40um)，行HE染色。 ④血清性激素測定：應(yīng)用RIA測定促黃體生成激素(Luteinizinghormone，LH)、促卵泡激素(Folliclestimulatinghormone，F(xiàn)SH)、雌二醇(Estradiol，E2)、孕酮(Progesterone，P)、睪酮(Testoterone，T)，以評定模型鼠的內(nèi)分泌改變。 ⑤子宮內(nèi)膜中AR和

9、TGF-β1的表達(dá)：應(yīng)用Westernblot分析。 3統(tǒng)計學(xué)處理選用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，進(jìn)行單因素方差分析;以α=0.05作為檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果1PCOS大鼠模型評價①動情周期的變化：實驗組在應(yīng)用來曲唑12天后動情周期失去規(guī)律性變化，提示無排卵。 ②卵巢、子宮解剖學(xué)及組織學(xué)改變：實驗組卵巢重量顯著高于實驗對照組及空白對照組(p＜0.05)。解剖學(xué)觀察卵巢表面較蒼白，體積

10、增大，可見較多囊狀擴(kuò)張的卵泡。組織學(xué)檢查顯示有較多早期發(fā)育的小卵泡和閉鎖卵泡；囊狀擴(kuò)張卵泡明顯增加，顆粒細(xì)胞層減少至2-3層；卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，黃體數(shù)量明顯下降并伴有不完全的黃素化。實驗組子宮重量顯著低于實驗對照組及空白對照組(p＜0.05)。 ③血清性激素測定：實驗組血清T，LH，F(xiàn)SH濃度顯著高于實驗對照組及空白對照組(p＜0.05)。實驗組血清E2，P濃度顯著低于實驗對照組及空白對照組(p＜0.05)。