VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表達及意義.pdf

1、 目的：多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)是常見于育齡婦女的生殖內(nèi)分泌疾病,以稀發(fā)排卵或無排卵、高雄激素血癥和多囊卵巢為主要特征,臨床表現(xiàn)多樣。PCOS 與胰島素抵抗、糖尿病以及肥胖關(guān)系密切,其發(fā)病機制仍未完全明確。大量未成熟卵泡形成排卵障礙性不孕是本病的重要原因,已有研究發(fā)現(xiàn)此與顆粒細胞的功能障礙有關(guān)。前期我們檢測Survivin、XIAP及Caspase-3在多囊卵巢顆粒細胞的表達情

2、況及其相關(guān)性,探討凋亡抑制蛋白基因及Caspase-3在多囊卵巢發(fā)生、發(fā)展中的作用,為多囊卵巢的治療提供了一定實驗依據(jù)。由于PCOS病因的復雜性,可能存在的病因較多,故本次希望從血管生長因子角度來研究探討該疾病的發(fā)病機制。PCOS的突出病理學特點之—,是卵巢間質(zhì)及卵泡囊的血管高度增生,導致排卵異常。血管生成因子的調(diào)節(jié)紊亂可引起血管增生異常,同時位于卵巢內(nèi)的血管生成因子,在卵巢局部通過自分泌與旁分泌,以及細胞內(nèi)調(diào)節(jié)途徑對卵巢顆粒細胞和卵泡

3、膜細胞等調(diào)控,對卵泡的正常發(fā)育具有重要作用。卵巢內(nèi)調(diào)節(jié)因子的異常可能是導致多囊卵巢的不排卵原因。VEGF、EG-VEGF、TGF-β1 作為血管生成因子,同時也作為卵巢內(nèi)局部調(diào)節(jié)因子與 PCOS 的發(fā)病有關(guān),本研究通過檢測 VEGF、EG-VEGF、TGF-β1 在多囊卵巢中的表達,進一步探討 PCOS 的發(fā)生機制。方法：1.選擇符合實驗組和對照組納入標準和排除標準的卵巢石蠟包埋組織。實驗組26例,年齡在14-39歲之間,平均28.8±

4、6.65歲；對照組12例,年齡17-39歲之間,平均29.5±5.72歲。上述患者術(shù)前均無激素服用史、陰道流血史。2.卵巢石蠟包埋組織用常溫切片機連續(xù)切片,經(jīng)攤片后貼附于載玻片上,60℃恒溫持續(xù)烘烤24小時,采用免疫組化Envision法檢測VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在各組卵巢卵泡顆粒細胞、卵泡膜細胞和卵巢間質(zhì)中的表達水平。3. 鏡下觀察： 采用日本OLYMPUS公司的Ax-70顯微成像系統(tǒng)進行觀察分析,每張切片隨機取8個(

5、×200)高倍視野。陽性細胞的條件：①細胞結(jié)構(gòu)清晰,有完整的細胞膜、細胞質(zhì)及細胞核結(jié)構(gòu)組成；②陽性顆粒定位、定性好；③細胞著色較背景染色顏色明顯。VEGF 陽性表達判斷以血管內(nèi)皮細胞中胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。EG-VEGF陽性表達判斷以血管內(nèi)皮細胞中胞漿出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。TGF-β1陽性表達判斷以細胞胞質(zhì)中出現(xiàn)黃棕、黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。4.圖像采集：由電腦進行采集

6、圖像,采用10×10倍鏡下觀察陽性表達的各級卵泡及間質(zhì),并查找囊狀卵泡；采用 10×10 倍以及×200 倍鏡下定位觀察囊狀卵泡細胞各層,沿細胞層取連續(xù)8個視野進行拍照。5.圖像分析：采用IPP(Image Pro plus)6.0圖像分析軟件,對囊狀卵泡顆粒細胞、卵泡膜細胞和卵巢間質(zhì)進行免疫組化著色后的定量分析及計算光密度(OD)值,其免疫組化著色的平均光密度(Average Optical Density；AOD)是該切片的分光密度

7、值。并比較各組間的差異以及兩組之間的差異所得數(shù)據(jù)均數(shù)±標準差(x ±s)表示,采用spss 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,各組間比較采用t檢驗,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果：實驗組與對照組年齡比較,P﹥0.05,差異無統(tǒng)計學意義。PCO組VEGF在卵巢顆粒細胞內(nèi)高表達,EG-VEGF在卵巢內(nèi)膜層及基質(zhì)中高表達,TGF-β1在竇狀卵泡細胞膜細胞和卵巢間質(zhì)的表達呈高表達。PCO組VEGF表達顯著高于正常組,P﹤0.05,有統(tǒng)計學意

8、義。PCO 組 EG-VEGF 表達高于正常組,P﹤0.05,有統(tǒng)計學意義。TGF-β1 在 PCO 組與正常卵巢組表達,P﹥0.05,無統(tǒng)計學意義。VEGF與EG-VEGF在PCO組中表達呈負相關(guān)。TGF-β1在PCO組與正常組差別無統(tǒng)計學意義。TGF-β1分別與VEGF、EG-VEGF在PCO組無相關(guān)性。結(jié)論：VEGF、EG-VEGF與PCO的發(fā)生、發(fā)展具有一定關(guān)系,TGF-β1 與 PCO 的發(fā)病可能關(guān)系不明顯,其中 VEGF 與