影響沃氏嗜膽菌生長(zhǎng)和代謝的腸道營(yíng)養(yǎng)及微生態(tài)成員研究.pdf

1、沃氏嗜膽菌（Bilophila wadsworthia）是人體腸道中普遍存在的一類細(xì)菌，在健康人體腸道中其豐度極低。而在高飽和脂肪飲食下，其豐度顯著升高，使得結(jié)腸炎在免疫缺陷（例如 Il10-/-）的宿主中的發(fā)生率顯著升高。將其灌胃至 Il10-/-無(wú)菌小鼠，B. wadsworthia可在高飽和脂肪飲食（牛奶脂肪）下定殖于小鼠腸道中，并導(dǎo)致小鼠罹患腸炎。由此可見，B. wadsworthia可能是人體和小鼠腸道中的一類機(jī)會(huì)性致病菌，其

2、在腸道中成為優(yōu)勢(shì)類群或者定殖于無(wú)菌小鼠腸道是致病性產(chǎn)生的前提之一。因此本研究對(duì)促進(jìn)B. wadsworthia生長(zhǎng)和代謝的營(yíng)養(yǎng)成分及腸道微生態(tài)成員進(jìn)行了探究。
　　首先，我們比較了6種培養(yǎng)基和3種電子供體對(duì)B.wadsworthia菌株的生長(zhǎng)狀況的影響。由全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線儀測(cè)定的結(jié)果顯示：厭氧基礎(chǔ)肉湯（Anaerobe Basal Broth，ABB）培養(yǎng)基最利于B. wadsworthia菌株的生長(zhǎng)，然而GAM肉湯培養(yǎng)基（GAM）

3、卻不利于B.wadsworthia菌株生長(zhǎng)。接著在ABB培養(yǎng)基中分別添加?；悄懰幔═aurocholic acid，TCA）、膽酸（Cholic acid，CA）和脫氧膽酸（Deoxycholate acid，DCA），觀察它們對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響。從比濁度測(cè)定和活菌計(jì)數(shù)的結(jié)果來(lái)看，TCA對(duì)菌株具有顯著的富集效應(yīng)，與添加相同摩爾濃度的牛磺酸（Taurine，TAU）帶來(lái)的效應(yīng)接近，CA和DCA對(duì)菌株無(wú)顯著效應(yīng)。
　　然后，在添加TCA

4、的ABB培養(yǎng)體系中，探究微生態(tài)成員是否能進(jìn)一步加速B. wadsworthia生長(zhǎng)。選用與 B. wadsworthia菌株分離自同一糖尿病患者腸道的Escherichia coli菌株與B. wadsworthia共培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)采集培養(yǎng)液，進(jìn)行比濁度和活菌計(jì)數(shù)測(cè)定，結(jié)果顯示：E. coli與 B. wadsworthia共培養(yǎng)組培養(yǎng)2天后 B. wadsworthia數(shù)量顯著高于B. wadsworthia單獨(dú)培養(yǎng)組。運(yùn)用氣相色譜測(cè)定硫

5、化氫（Hydrogen sulphide，H2S）的濃度，測(cè)定結(jié)果與活菌計(jì)數(shù)相符，培養(yǎng)1天時(shí)共培養(yǎng)組中H2S濃度顯著高于單獨(dú)培養(yǎng)組約2倍。通過(guò)液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)，測(cè)定TCA相關(guān)代謝產(chǎn)物CA及DCA的組成變化，發(fā)現(xiàn)B. wadsworthia菌株能夠代謝TCA產(chǎn)生游離型膽汁酸即CA，但是不能進(jìn)一步代謝CA產(chǎn)生DCA；E. coli菌株既不能代謝TCA也不能代謝CA。沉淀圈實(shí)驗(yàn)和膽鹽水解酶基因的擴(kuò)增結(jié)果與膽汁酸測(cè)定結(jié)果一致，提示B. wa

6、dsworthia通過(guò)分解TCA產(chǎn)生TAU為自身提供電子受體可能是B. wadsworthia可利用TCA快速生長(zhǎng)的重要機(jī)制。本研究還揭示了：E. coli是顯著促進(jìn)B.wadsworthia生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)生H2S的微生態(tài)成員，但這種促進(jìn)效應(yīng)并不是通過(guò)協(xié)助產(chǎn)生TAU的機(jī)制實(shí)現(xiàn)。
　　最后，通過(guò)正常飲食的ICR小鼠模型對(duì)本實(shí)驗(yàn)所用的B. wadsworthia分離株的定殖能力、急性致病特性及其可能對(duì)宿主健康產(chǎn)生的影響進(jìn)行了研究。B.w

7、adsworthia單獨(dú)灌胃組及聯(lián)合E. coli灌胃組在連續(xù)灌胃期間糞便樣品中均可檢出B. wadsworthia，在停止灌胃的2天后糞便中無(wú)法檢出B. wadsworthia，這提示B. wadsworthia可在小鼠腸道存活，但無(wú)法定殖。連續(xù)灌胃4天和尾靜脈注射后2天內(nèi)均無(wú)小鼠死亡的結(jié)果提示B. wadsworthia無(wú)急性毒性反應(yīng)。有趣的是，體重監(jiān)測(cè)的結(jié)果顯示：B. wadsworthia菌株和E. coli菌株聯(lián)合灌胃組在連續(xù)