間充質(zhì)干細(xì)胞在兒童異基因造血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用研究.pdf

1、一、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及超微結(jié)構(gòu)觀察
　　 目的：分離培養(yǎng)足月新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，進行超微結(jié)構(gòu)觀察。
　　 方法：用膠原酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，進行傳代培養(yǎng)、擴增，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。培養(yǎng)至3代的間充質(zhì)干細(xì)胞進行免疫表型測定，進行成脂細(xì)胞、成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化實驗，并在透射電鏡、掃描電鏡下進行超微結(jié)構(gòu)的全面觀察。
　　 結(jié)果：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外觀呈梭形和多角形，并可見細(xì)胞核；高表達

2、CD44，CD73，CD105，不表達CD34，CD45，CD31和HLA-DR;能夠進行成脂、成骨、成軟骨分化；掃描電鏡下可見細(xì)胞表面有短而粗的微絨毛突起，透射電鏡下可見到兩種不同的細(xì)胞形態(tài)。一種是處于靜止期，細(xì)胞核大，圓或卵圓形，僅有一個核仁，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器少；另一種是處于相對活躍期，同一個細(xì)胞內(nèi)可以看到1個或2個細(xì)胞核，細(xì)胞器數(shù)量豐富、結(jié)構(gòu)清晰，并可見擴張的線粒體。
　　 結(jié)論：從臍帶中成功分離培養(yǎng)的細(xì)胞，具有間充質(zhì)干細(xì)胞的

3、生物學(xué)特性，具有兩種不同狀態(tài)的超微結(jié)構(gòu)。
　　 二、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療兒童異基因造血干細(xì)胞移植后急性移植物抗宿主病療效觀察
　　 目的：觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSC)治療兒童急性移植物抗宿主病療效和安全性。
　　 方法：用膠原酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)于細(xì)胞，進行傳代培養(yǎng)、擴增，培養(yǎng)至第3-5代用于臨床治療；5例急性白血病患兒經(jīng)化療達完全緩解。2例行親緣HLA3

4、/6相合的骨髓造血干細(xì)胞移植，1例行同胞HLA全相合骨髓與外周血造血干細(xì)胞聯(lián)合移植，1例行無血緣相關(guān)HLA4/6相合雙份臍血造血干細(xì)胞移植，1例行無血緣相關(guān)HLA5/6相合單份臍血造血干細(xì)胞移植。患兒發(fā)生Ⅲ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)，接受二線免疫抑制治療無效后，行人臍帶MSC（0.5×106/kg受者體重）治療。
　　 結(jié)果：5例急性白血病患兒均獲造血重