單細胞全基因組擴增聯(lián)合比較基因組雜交方法的建立及初步研究.pdf

1、比較基因組雜交技術因其僅通過一次試驗就可以得到染色體擴增或缺失的詳細信息而廣泛應用于分子遺傳學領域，將單細胞全基因組擴增技術與比較基因組技術相聯(lián)合就可以解決痕量標本的全面分子遺傳學檢測的難題，在臨床及法醫(yī)學領域有著很好的應用前景。目的：建立單細胞全基因組擴增技術，并在此基礎上摸索適于分析單細胞遺傳學信息的比較基因組雜交技術的條件。方法：以單個人外周血淋巴細胞為材料，采用寡核苷酸引物聚合酶鏈反應擴增單細胞全基因組，并研究新鮮細胞與冷藏細胞

2、及采用新鮮和凍存的細胞裂解物為模板對擴增產(chǎn)物的均勻性及特異性的影響；以單細胞擴增產(chǎn)物為標本，通過研究單細胞全基因組擴增產(chǎn)物的均勻性及片段大小、切口平移中不同片段大小的酶切片段、中期染色體玻片制作及變性時間對雜交效果的影響，建立能夠全面、準確進行遺傳學分析的比較基因組雜交技術，并對雜交結果進行評定，選擇良好雜交效果的中期染色體進行軟件分析；以來源于特納綜合征患者的淋巴細胞為材料，行已建立好的單細胞全基因組擴增聯(lián)合比較基因組雜交技術進行分析

3、，對所建立方法進行評價。結果：在單細胞全基因組擴增中，以新鮮的淋巴細胞為模板與以冷藏的淋巴細胞為模板相比，擴增產(chǎn)物的均勻性相當，特異性上新鮮細胞較好；細胞裂解后立即進行擴增的效果在產(chǎn)物的均勻性及特異性方面均明顯優(yōu)于凍存的細胞裂解物。擴增產(chǎn)物均勻且擴增片段介于200-2000bp左右，切口平移中酶切片段大小為100-1500bp范圍的片段，中期染色體玻片的變性時間為3.5分鐘，產(chǎn)生的雜交效果最好。在對陽性標本行所建立的方法進行檢測，通過軟