穴位貼敷聯(lián)合穴位注射烏體林斯對OVA誘導(dǎo)哮喘大鼠氣道炎癥和高反應(yīng)性的影響.pdf

1、目的：
　　1.觀察穴位貼敷聯(lián)合穴位注射烏體林斯治療哮喘的效果。
　　2.通過檢測肺組織白介素(IL)-4、IL-5，血清IL-4、免疫球蛋白E(IgE)水平，觀察肺組織核因子-kappaB(NF-κB)活化情況，肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)，肺組織病理變化，探討貼敷聯(lián)合穴注在抑制哮喘氣道炎癥上的可能機(jī)制。
　　3.通過檢測肺組織內(nèi)皮素-1(ET-1)的變化，探討穴注和貼敷對哮喘氣道高反應(yīng)影響。
　

2、　方法：65只清潔級級雄性Wistar大鼠(4周齡)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組{正常組、哮喘組、貼注組(貼敷+穴注組)、布地奈德組、聯(lián)合組}，每組13只。哮喘組大鼠以10％卵蛋白分兩次(第1天，第8天)腹腔注射致敏，每次1ml(內(nèi)含OVA100mg，Al(OH)3100mg)，第15天以2%卵蛋白連續(xù)激發(fā)制作哮喘模型。正常組以生理鹽水代替OVA進(jìn)行上述程序。觀察大鼠出現(xiàn)煩躁，咳嗽，呼吸加快，點頭呼吸，行動遲緩,口唇紫紺,甚至腹肌痙攣等

3、癥狀，隨著激發(fā)次數(shù)的增加觀察到以上癥狀在每次激發(fā)的早期即出現(xiàn)；取血檢測嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計數(shù)和分類計數(shù)，發(fā)現(xiàn)其增高符合相關(guān)文獻(xiàn)報道水平；取肺組織HE染色后鏡下觀察可見肺組織炎性浸潤；綜合以上3個條件認(rèn)為造模成功。造模成功后開始治療，貼注組選取大椎穴、雙定喘穴、雙肺俞穴、雙腎俞穴，使用科室自制貼敷藥物進(jìn)行貼敷，選取雙定喘、雙肺俞穴交替使用烏體林斯穴位注射(穴位注射后不再貼敷藥物)，3次/周；布地奈德組給予吸入用布地奈德霧化吸入溶液霧化

4、治療，1/日；聯(lián)合治療組采用貼敷、穴位注射、布地奈德霧化3種方法進(jìn)行治療,共治療一個月(計12次)。治療期間每周給予3次激發(fā)以模擬哮喘慢性持續(xù)期。實驗過程中觀察各組大鼠一般情況，處死前再次給予激發(fā)，24小時內(nèi)取材，標(biāo)本包括支氣管肺泡灌洗液(BALF)、動脈血及肺組織標(biāo)本。血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)大鼠BALF中總細(xì)胞數(shù)和分類比例；蘇木精-伊紅染色(HE)后鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行炎細(xì)胞浸潤評分；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測大鼠血清總I

5、gE、IL-4,放射免疫法測定肺組織中ET-1、IL-4、IL-5；免疫組化染色后鏡下觀察肺組織NF-κBp65胞核陽性表達(dá)情況，顯微圖像分析系統(tǒng)分析陽性細(xì)胞積分光密度值(IOD)。
　　結(jié)果：
　　1.與正常組比較，哮喘組肺組織病理結(jié)果顯示炎細(xì)胞浸潤和氣道損傷程度較重，炎細(xì)胞浸潤評分增高有統(tǒng)計學(xué)意義。與哮喘組比較，貼注組、布地奈德組、聯(lián)合組，大鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤評分均降低,有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.與正常組比較，哮喘

6、組大鼠體質(zhì)量降低；BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性%、淋巴%、EOS%，血清IL-4、IgE，肺組織ET-1、IL-4、IL-5和NF-κB陽性細(xì)胞IOD值明顯升高。
　　3.與哮喘組比較，各治療組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性%、淋巴%、EOS%，血清IL-4、IgE，肺組織ET-1、IL-5、IL-4和NF-κB陽性細(xì)胞IOD值均降低；體重改變無差異。
　　4.各治療組之間比較：與貼敷組、布地奈德組比較，聯(lián)合組BALF中總細(xì)胞和分

7、類計數(shù)，血清IL-4、IgE，肺組織ET-1、IL-5、IL-4和NF-κB陽性細(xì)胞IOD值降低更明顯；與貼注組比較，布地奈德組BALF中總細(xì)胞和分類計數(shù)，血清IL-4、IgE，肺組織IL-5、IL-4、NF-κB陽性細(xì)胞IOD值降低明顯,肺組織ET-1改變無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.相關(guān)性分析:肺組織IL-4與IOD呈正相關(guān)；肺組織IL-5與IOD呈正相關(guān)；血清IL-4與IgE水平呈正相關(guān)；肺組織IL-5和EOS%呈正相關(guān)。

8、　　結(jié)論：
　　1.通過抗原致敏并反復(fù)激發(fā)所致OVA特異性哮喘大鼠模型復(fù)制成功。
　　2.哮喘組BALF中細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)百分比，血清IL-4、IgE水平，肺組織IL-5、IL-4、ET-1表達(dá)升高；NF-κB由胞漿進(jìn)入細(xì)胞核，IOD值升高，說明這些指標(biāo)參與哮喘發(fā)生；那么治療組的這些指標(biāo)的表達(dá)情況對治療后哮喘的評估以及治療方法有效性具有指導(dǎo)意義。
　　3.穴位貼敷加穴位注射治療在改善以上指標(biāo)的作用不如單獨使用激素，但