妊娠期糖尿病胎盤組織PPAR_對MMP-2--9表達的影響.pdf

1、目的：初步闡明GDM胎盤組織中PPARγ對MMP-2、MMP-9表達的影響及其在GDM病理過程中的作用，為探索GDM胎盤的損傷機制提供重要依據(jù)。
　　方法：（1）人胎盤來源：于2014年5月-2015年5月，選取在銅陵市某婦幼保健院產(chǎn)前門診進行常規(guī)產(chǎn)檢的孕早期單胎孕婦，排除肝腎疾病、代謝性疾病、遺傳性疾病等基礎(chǔ)性疾病的患者，以及孕前已確診患有糖尿病的患者。孕24-28周期間，對研究對象進行口服葡萄糖耐量（OGTT）試驗，然后根據(jù)O

2、GTT的試驗結(jié)果分組，分為正常組與GDM組。在孕婦分娩時收集胎盤樣本。（2）鼠胎盤來源：C57BL/6J小鼠120只，試驗前動物自由進食標(biāo)準飼料，在光照/黑暗12h/12h、室溫（20~25）℃，濕度為（50±5）%環(huán)境中適應(yīng)1周，雌雄合籠（按照2:1的比例），第二天早晨7點檢查陰栓，如果檢查到陰栓則為交配成功，并規(guī)定為孕0日（GD0）。用0.1mol/L枸櫞酸鈉緩沖液配制濃度為0.25%，pH4.2的鏈脲霉素（STZ）溶液。小鼠禁食1

3、2h，在GD6、GD7、GD8連續(xù)3天按80 mg/kg的劑量腹腔內(nèi)注射 STZ溶液，采取尾靜脈血檢測血糖，2d內(nèi)血糖≥16.8mmol/L并且能穩(wěn)定3d，即為 GDM模型構(gòu)造成功。對照組小鼠腹腔注射生理鹽水，與STZ溶液等量。建模成功后GD10~GD18期間，選取小鼠36只，隨機均分成對照組、GDM組和羅格列酮組這3個組，每組各有小鼠12只。在干預(yù)期間，小鼠自由攝食和飲水，同時不使用胰島素或其他降糖藥物。在 GD10~GD18期間，羅

4、格列酮干預(yù)組給藥方案如下：羅格列酮，30 mg/kg·d p.o.。GD18處死孕鼠，取胎盤按各自測定方法做好前處理后待測。對于收集來的鼠胎盤和人胎盤樣本，采用HE染色觀察胎盤組織病理損傷情況，免疫組化法測定PPARγ、MMP-2、MMP-9的蛋白表達部位，Real-Time-PCR法檢測PPARγ、MMP-2、MMP-9的mRNA的表達水平，Western blot法檢測PPARγ、MMP-2、MMP-9的蛋白表達水平。
　　結(jié)

5、果：(1)人胎盤與鼠胎盤HE染色結(jié)果均顯示，與對照組相比，GDM組胎盤血管分布比較紊亂，血細胞相對減少，血管壁相對較薄，而在使用羅格列酮干預(yù)后，血細胞有所增多，并且血管分布相對整齊。
　　(2)PPARγ蛋白主要表達在胎盤的絨毛細胞滋養(yǎng)細胞、合體滋養(yǎng)細胞中，其在胎盤微絨毛膜側(cè)的表達強度較高；在胎盤中，MMP-2蛋白主要是在絨毛細胞滋養(yǎng)細胞、合體滋養(yǎng)細胞中表達，絨毛間質(zhì)細胞也有少量，其在胎盤微絨毛膜側(cè)的表達強度較高；在胎盤中，MMP

6、-9蛋白主要是在絨毛細胞滋養(yǎng)細胞、合體滋養(yǎng)細胞中表達，絨毛間質(zhì)細胞也有少量存在，其在胎盤微絨毛膜側(cè)的表達強度較高。
　　(3)在人胎盤RT-PCR實驗中，與對照組相比，GDM組PPARγ的mRNA的表達水平明顯有下降的趨勢（P<0.01），MMP-2、MMP-9的 mRNA表達水平上升(P<0.05)；在鼠胎盤RT-PCR實驗中，與對照組相比，GDM組PPARγ的mRNA的表達水平明顯有下降的趨勢（P<0.01），MMP-2、MM

7、P-9的mRNA表達水平上升(P<0.05)；與GDM組相比，羅格列酮干預(yù)組PPARγ的mRNA表達水平上升(P<0.05)，MMP-2的mRNA表達水平下調(diào)（P<0.05），MMP-9的mRNA表達水平無明顯變化(P>0.05)。
　　(4)在人胎盤免疫印跡試驗中，與對照組比較，GDM組PPARγ蛋白表達水平呈下調(diào)趨勢（P<0.05），MMP-2、MMP-9蛋白表達水平呈上升趨勢（P<0.05）；在鼠胎盤免疫印跡試驗中，與對照組