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1、目的:研究B.1a細(xì)胞對(duì)抗原刺激的增殖和凋亡反應(yīng)以及自身免疫性溶血性貧血患者外周血B.1a細(xì)胞的變化,初步闡述B.1a細(xì)胞與AIHA的關(guān)系。 方法:1、腹腔灌洗獲得Babl/C小鼠腹腔細(xì)胞,CD90免疫磁珠陰性選擇繼以CD5免疫磁珠陽(yáng)性選擇純化B-la細(xì)胞,以不同濃度的F(ab’)2GQMIgM(O,5,10,20,40ug/m1)處理,分別培養(yǎng)24h,48h,72h后,用MTT法測(cè)定其增殖反應(yīng),Annexin—V法測(cè)定其凋亡。
2、2、用CD5CDl9雙標(biāo)抗體和流式細(xì)胞儀檢測(cè)20名正常對(duì)照,13名自身免疫性溶血性貧血患者發(fā)病初期,4名脾切除術(shù)后的AIHA患者以及10名外傷后脾切除患者的外周血B細(xì)胞和B一1a細(xì)胞占總的淋巴細(xì)胞百分比。 結(jié)果:1、與空白對(duì)照組相比,接受抗原刺激的B.1a細(xì)胞的增殖反應(yīng)明顯減弱,同時(shí)凋亡增加,抗原F(ab’)2GQMIgM濃度20ug/ml時(shí)的效應(yīng)趨向最大,并且在24h,48h,72h各個(gè)時(shí)間段無(wú)明顯區(qū)別。2、正常人外周血B-1
3、a細(xì)胞占總的淋巴細(xì)胞百分比為(0.78±O.16)﹪,AIHA患者發(fā)病初期外周血B.1a細(xì)胞百分比為(2.58±O.63)﹪,AIHA患者脾切除術(shù)后外周血B.1a細(xì)胞百分比降至(O.58±O.37)﹪,外傷后脾切除患者外周血B一1a細(xì)胞百分比為(0.65±0.43)﹪。 討論:與CD5'B細(xì)胞(即B2細(xì)胞)相反,B.1a細(xì)胞接受抗原刺激后,不表現(xiàn)出增殖反應(yīng),反而啟動(dòng)凋亡。這種現(xiàn)象提示CD5分子對(duì)BCR的信號(hào)傳導(dǎo)有負(fù)向調(diào)節(jié)的作用。
4、正常情況下,B-la細(xì)胞分泌非致病性的低親和力抗體,有證據(jù)表明B.h細(xì)胞也是致病性自身抗體產(chǎn)生的來源。接受抗原刺激后,B.1a細(xì)胞表面的CD5分子抑制細(xì)胞增殖,啟動(dòng)凋亡,從而保證B一1a細(xì)胞不致過量增殖而出現(xiàn)病理狀態(tài)。如果B.1a細(xì)胞的CD5分子有缺陷,則其對(duì)B.1a細(xì)胞的負(fù)向調(diào)節(jié)解除,接受了抗原刺激的B一1a細(xì)胞分子大量增殖,凋亡受抑,則可能分泌致病性抗體。AIHA患者外周血B一1a細(xì)胞比例明顯增高,且AIHA患者接受脾切除手術(shù)溶血得
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