自身免疫性溶血性貧血患者CD5+B淋巴細(xì)胞活性及分泌功能研究.pdf

1、自身免疫性溶血性貧血（Autoimmune Hemolytic Anemia，AIHA）/Evans綜合征是一類產(chǎn)生自身抗紅細(xì)胞和/或抗血小板抗體為主的免疫性血細(xì)胞減少癥，B淋巴細(xì)胞在AIHA/Evans發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用，除合成和分泌自身抗體的CD5-B淋巴細(xì)胞外，還發(fā)現(xiàn)存在CD5+B淋巴細(xì)胞[1-3]，既往研究發(fā)現(xiàn)CD5+B淋巴細(xì)胞數(shù)量與AIHA/Evans綜合征疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)[4]，許多研究表明CD5+B淋巴細(xì)胞主要通過

2、分泌 IL-10發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[5-7]。慢性淋巴細(xì)胞白血?。╟hronic lymphocytic leukemia, CLL）是CD5+的B淋巴細(xì)胞惡性腫瘤性疾病， AIHA是CLL最常見的并發(fā)癥，文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)生率5％~25%[8-11]，CLL并發(fā)AIHA的機(jī)制仍未明了。AIHA/Evans綜合征患者CD5+B淋巴細(xì)胞的活化狀態(tài)如何？與CD5-B淋巴細(xì)胞是否類似？與 CLL克隆性 CD5+B淋巴細(xì)胞是否相同？AIHA/Evans患

3、者CD5+B淋巴細(xì)胞中是否存在具有分泌IL-10和TGF-β1免疫調(diào)控細(xì)胞？本論文擬檢測(cè)AIHA/Evans綜合征患者、健康對(duì)照及CLL患者外周血CD5+B淋巴細(xì)胞表面活化分子CD80、CD86、CD69和CD40，并分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性；同時(shí)以上患者檢測(cè)CD5+B淋巴細(xì)胞分泌IL-10、TGF-β1的功能。故本論文分為CD5+B淋巴細(xì)胞活化分子及分泌功能兩方面進(jìn)行研究。
　　第一部分 AIHA/Evans患者CD5+B淋巴細(xì)

4、胞活化分子表達(dá)及臨床意義
　　目的：檢測(cè)AIHA/Evans綜合征患者外周血CD5+B淋巴細(xì)胞比例及其表面活化分子CD80、CD86、CD69及CD40表達(dá)，并且分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，了解AIHA/Evans綜合征患者外周血CD5+B淋巴細(xì)胞的活化狀態(tài)。
　　方法：研究對(duì)象為15例初治AIHA/Evans綜合征患者，15例緩解AIHA/Evans綜合征患者，健康志愿者18名，CLL組9例，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)各組

5、外周血CD19+B淋巴細(xì)胞及CD5+B淋巴細(xì)胞比例，并檢測(cè)各組CD5+和CD5-B淋巴細(xì)胞CD80、CD86、CD69及CD40的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、初治組AIHA/Evans綜合征B淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞比例和絕對(duì)值分別為[(19.35±16.20)%、(29.73±19.92)×107/L]，均高于緩解[(6.58±4.43)%、(10.96±7.98)×107/L]及健康對(duì)照組[(6.69±2.12)%、(9.9

6、2±4.03)×107/L]（P＜0.05）。B淋巴細(xì)胞比例及絕對(duì)值與HB呈負(fù)相關(guān)（r=-0.537，r=-0.588，P＜0.05），與Ret%呈正相關(guān)（r=0.461，r=0.410，P＜0.05），與LDH呈正相關(guān)（r=0.492，r=0.481，P＜0.05）。初治組CD5+B淋巴細(xì)胞占B淋巴細(xì)胞[(22.01±15.04)%]高于健康對(duì)照組[(12.47±6.47)%，P=0.018]。
　　2、初治組CD5+B淋巴細(xì)胞

7、CD80高于緩解（P=0.017）、健康對(duì)照（P=0.006）和CLL組（P=0.001）；緩解及健康對(duì)照組CD5+B淋巴細(xì)胞CD80均低于CD5-B淋巴細(xì)胞（P=0.010，P=0.000）。CD5+B淋巴細(xì)胞CD80與HB、C3、C4均呈負(fù)相關(guān)（P=0.000，P=0.025，P=0.005），與Ret比例及絕對(duì)值均呈正相關(guān)（P=0.006， P=0.033）。
　　3、初治組CD5+B淋巴細(xì)胞CD86高于緩解（P=0.04）

8、及健康對(duì)照組（P=0.005）；CLL組CD5+B淋巴細(xì)胞CD86高于健康對(duì)照及AIHA/Evans緩解組（P=0.019， P=0.04）。初治組CD5+B淋巴細(xì)胞CD86高于CD5-B淋巴細(xì)胞（P=0.015）。CD5+B淋巴細(xì)胞CD86與HB、C3、C4均呈負(fù)相關(guān)（P=0.028，P=0.011，P=0.002），與Ret比例及絕對(duì)值均呈正相關(guān)（P=0.045，P=0.020）。
　　4、初治組CD5+B淋巴細(xì)胞CD69與緩

9、解及健康對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，CLL組CD5+和CD5-B淋巴細(xì)胞CD69均高于AIHA/Evans及健康對(duì)照組（均P＜0.05）。
　　5、各組CD5+B淋巴細(xì)胞CD40均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；初治及健康對(duì)照組CD5+與 CD5-B淋巴細(xì)胞 CD40無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；緩解組 CD5+B淋巴細(xì)胞 CD40低于CD5-B淋巴細(xì)胞（P=0.027）。
　　結(jié)論：AIHA/Evans患者外周血B淋巴細(xì)胞比例及數(shù)量增高，以CD5+B淋巴細(xì)胞為主，

10、并處于活化狀態(tài)，細(xì)胞表面的活化分子既與CLL中克隆性CD5+B淋巴細(xì)胞有相同之處，也有不同之處；與健康對(duì)照中 CD5-B淋巴細(xì)胞的也不盡相同，CD80、86在CD5+B淋巴細(xì)胞活化中發(fā)揮重要作用，決定了其在AIHA中功能。
　　第二部分 AIHA/Evans患者CD5+B淋巴細(xì)胞分泌功能研究
　　目的：檢測(cè)AIHA/Evans綜合征患者分泌IL-10及TGF-β1的外周血CD5+B淋巴細(xì)胞比例，并分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，了

11、解AIHA/Evans綜合征患者外周血CD5+B淋巴細(xì)胞的分泌功能。
　　方法：選取2014年7月至2015年10月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院血液科住院的AIHA/Evans綜合征患者52例，初治25例，緩解28例，健康對(duì)照25名，F(xiàn)CM測(cè)外周血分泌IL-10及TGF-β1的CD5+B淋巴細(xì)胞比例；免疫磁珠方法分選外周血B淋巴細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)IL-10及TGF-β1 mRNA表達(dá)；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA

12、）法測(cè)血漿IL-10及TGF-β1水平。
　　結(jié)果：
　　1、初治組患者外周血 CD5+CD19+IL-10+/CD5+CD19+淋巴細(xì)胞比例[(82.18±14.78)%]高于緩解組[(56.68±24.39)%， P=0.013]及健康對(duì)照組[(51.90±22.95)%，P=0.005]，三組外周血CD5-CD19+IL-10+B淋巴細(xì)胞比例無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CD5+CD19+IL-10+/CD5+CD19+淋巴細(xì)胞比例與

13、 HB、C3均呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.05），與LDH、TBIL、IBIL均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。
　　2、初治組患者外周血B淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-10 mRNA表達(dá)(62.34±52.84)高于緩解(4.33±3.83)及正常對(duì)照組(1.78±1.66)（均P＜0.05）。
　　3、初治組患者血漿IL-10水平[(4.01±1.54)pg/ml]低于緩解[(5.08±1.72)pg/ml]及健康對(duì)照組[(5.70±1.60)p