白樺木質(zhì)素生物合成酶基因分離及遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：05074學(xué)位論文白樺木質(zhì)素生物合成酶基因分離及遺傳轉(zhuǎn)化的研究指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：劉雪梅楊傳平教授王秋玉教授博士2005年4月東j匕林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：論文答辯日期：授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾必櫛素大學(xué)林木遺傳育種2005年5月性范圍是722％一844％；(3)不同屬的植物同源性和系統(tǒng)發(fā)生的親緣關(guān)系，會(huì)由于不同的比較序列而發(fā)生改變，對(duì)于

2、特定的兩種植物，不能依賴某一個(gè)或幾個(gè)基因的同源性對(duì)二者的親緣關(guān)系下定論；(4)同一基因在某個(gè)屬的不同種之間，序列的同源性非常高，是高度保守的。本研究的第二項(xiàng)內(nèi)容是利用分離的白樺CCoAOMT基因反義轉(zhuǎn)化煙草。將分離的白樺CCoAOMT基因的全長(zhǎng)eDNA與載體pBll21進(jìn)行重組，將重組后的CCoAOMT基因反義表達(dá)載體命名為pBPCOA。通過(guò)根癌農(nóng)桿菌EHAl05介導(dǎo)，進(jìn)行煙草的基因轉(zhuǎn)化。在有關(guān)報(bào)道的基礎(chǔ)上確定了煙草轉(zhuǎn)化基本程序，其中的

3、某些要素是：分化培養(yǎng)基類型、無(wú)預(yù)培養(yǎng)或預(yù)培養(yǎng)兩天、侵染515rain、共培養(yǎng)24天、采用前期選擇、延遲選擇和后期選擇。利用GUS基因表達(dá)檢測(cè)共培養(yǎng)后2天、4天和未經(jīng)共培養(yǎng)的煙草葉片，結(jié)果前二者均表達(dá)，產(chǎn)生靛藍(lán)色物質(zhì)，而對(duì)照沒(méi)有。共培養(yǎng)后選擇培養(yǎng)基中選擇壓為卡那霉素5080mg／L，農(nóng)桿菌抑菌劑為羧芐青霉素250750mg／L。將在選擇培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)的煙草苗進(jìn)行DNA分離，然后利用白樺CCoAOMTcDNA引物以煙草DNA作為模板進(jìn)行P

4、CR擴(kuò)增，結(jié)果顯示：在檢測(cè)的5株中有2株擴(kuò)增出了754bp的特異帶。最后進(jìn)行了PCRSouthern雜交檢測(cè)，結(jié)果與對(duì)應(yīng)的PCR結(jié)果基本相符，即：T41、T49和T62樣品產(chǎn)生較強(qiáng)的雜交信號(hào)，T31雖然PCR電泳較弱，但雜交信號(hào)清晰可見，T33無(wú)雜交信號(hào)，說(shuō)明是轉(zhuǎn)基因陰性，與GUS檢測(cè)和PCR檢測(cè)結(jié)果基本相符，由此斷定，T31、T41、T49和T62煙草轉(zhuǎn)基因苗基因組DNA已經(jīng)整合了轉(zhuǎn)入的白樺CCoAOMT基因。關(guān)鍵詞：白樺；4CL；C