亞麻木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶CAD基因的克隆與分析.pdf_第1頁(yè)
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1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文亞麻木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶CAD基因的克隆與分析姓名：黃海燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：王玉富20080501AbstractFlaxisaveryimportantsourceofnaturalfibresinthetextileindustryplaysallimportantroleinChineseeconomyandpeople’SlifeLigninisdifficulttoberemo

2、vedduringrettingprocessLigninhasagreaterimpactonthefiberqualityandperformanceofthetextilesImprovingattributeofflaxfibreviageneengineering，carrymgoutlowlignmbreeding，decreasingthecontentofligninandalteringitscomponentssee

3、mtobegoodwaystosolvertheproblemsInthispapertheflaxCADgeneWasclonedbyRTPCRusingapairofprimersweredesignedfromthesequencesofexistingCADgenesAntisenseCADgeneexpressionvectorofflaxhasbeenconstructed。Theresultsareasfollows：(1

4、)HighqualityflaxRNAwasextractedbyPlantRNAIsolationRegentandreversetranscribedintoeDNAusingSuperscriptRTKitThisisallefficientmethodforcloningtargetgenesfromplantwhichcontainsrichmultifarioussecondarymetabolitesuchaspectin

5、andpolysaccharide(2)AflaxeDNAfragmentWasamplifiedbyReverseTranscriptionPolymersChainReaction(RTPCR)usingapairofprimersweredesignedfromthesequencesofexistingCADgenesSequencinganalysisshowedthatthePCRproductswere477bpwith9

6、5％identitytotheCADgeneregisteredintheGenBankTheresultprovedthattheclonedgenefragmentshouldbeCADgenefragmentoftheflax(3)ThefulllengthsequenceoffalxCADgenecDNAwasclonedbyRACESequencinganalysisshowedthatthePCRproductswere89

7、6bp嘶t1192％identitytotheCADgenesequenceregisteredintheGenBank(4)TointroduceproperrestrictionsitesforsubsequentcloningintotheplantexpressionvectorboththepGEM一7Zf(一)vectorandthepGEMTCADwerecutbyEcoRItoreleasetheCADgenefragm

8、entandthepGEM一7Zf()fragment，ThetwofragmentwerejoinedtogethertoproduceanewplasmidpGEM一7Zf(一)一CAD(5)ThepGEM一7Zf()一CADplasmidandthebinaryvectorpBI121werecutbyXbaIandBamHIteleasetheCADgenefragmentandthelargefragmemsofpBll21A

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