褪黑素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)心肌肥厚的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　研究探討褪黑素對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)心肌肥厚的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法:
　　(1)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞分為五組:對(duì)照組、LPS組、LPS+褪黑素（1.5mg/L）組、LPS+褪黑素（3mg/L）組、LPS+褪黑素（6mg/L）組，在倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;
　　(2)通過(guò)RC DCTM Protein Assay Kit檢測(cè)各組心肌細(xì)胞蛋白水平。
　　(3)通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（E

2、LISA）檢測(cè)各組心肌細(xì)胞腫瘤壞死因子（TNF-α）的分泌水平;
　　(4)利用Realtime PCR和Western blot檢測(cè)各組心肌細(xì)胞腫瘤壞死因子受體1（TNFR1）基因和蛋白表達(dá)水平變化;
　　(5)采用 Ca2+探針 Fura-2/AM在影像系統(tǒng)下記錄各組心肌細(xì)胞 Ca2+內(nèi)流情況。
　　(6)Western blot檢測(cè)各組心肌細(xì)胞內(nèi)CaN和CaMKⅡδB蛋白水平變化。 結(jié)果:
　　LP

3、S能夠誘導(dǎo)心肌肥厚、促進(jìn) TNF-?的分泌和 TNFR1的表達(dá)及增加 Ca2+內(nèi)流。在LPS誘導(dǎo)損傷之前預(yù)先給予不同濃度的褪黑素，能夠減弱 LPS誘導(dǎo)的心肌肥厚，降低心肌細(xì)胞 TNF-?的分泌和 TNFR1,CaN和CaMKⅡδB的表達(dá)和 Ca2+內(nèi)流，并且在濃度（1.5mg/L、3mg/L、6mg/L）范圍內(nèi)呈劑量依賴性。
　　結(jié)論
　　在體外試驗(yàn)中褪黑素通過(guò)下調(diào)TNF-α和TNFR1的表達(dá)和維持Ca2+內(nèi)穩(wěn)態(tài)拮抗 LPS