丁苯羥酸對脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、急性肺損傷（Acute lung injury,ALI）是由各種非心源性嚴(yán)重肺內(nèi)外因素導(dǎo)致的肺毛細(xì)血管彌漫性損傷、通透性增加，進(jìn)而演變?yōu)榉嗡[、透明膜形成和肺不張為主要病理學(xué)特征的疾病。ALI的主要臨床表現(xiàn)為急性進(jìn)行性加重的呼吸困難和難治性低氧血癥，病情進(jìn)一步惡化后，可形成急性呼吸窘迫綜合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）。ALI/ARDS發(fā)病機(jī)制的實質(zhì)是炎癥反應(yīng)的失控而導(dǎo)致彌漫性肺損

2、傷和呼吸功能障礙。在臨床上除了保護(hù)性機(jī)械通氣外，目前并沒有很好的治療藥物上市，因此開發(fā)新型治療藥物或靶點具有非常重要的理論和實際意義。
　　丁苯羥酸是一種已上市多年的非甾體抗炎藥，對治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、濕疹和其它多種皮膚炎癥等有較好的療效，但其抗炎的作用機(jī)制目前仍不清楚。中性粒細(xì)胞趨化是造成急性肺損傷中炎癥失控的根本原因，由白三烯A4水解酶（Leukotriene A4hydrolase,LTA4H）催化生成的白三烯B4(Leuk

3、otriene B4,LTB4)是介導(dǎo)中粒細(xì)胞趨化的強(qiáng)效趨化因子之一，因此LTA4H抑制劑可以作為急性肺損傷的候選治療藥物。我們通過LTA4H抑制劑高通量篩選平臺對已上市藥物庫進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)丁苯羥酸可以作為一種LTA4H抑制劑，能夠有效地抑制LTA4水解為LTB4，從而影響中性粒細(xì)胞的趨化，對急性肺損傷起保護(hù)作用。本文利用結(jié)構(gòu)生物學(xué)和小鼠急性肺損傷模型研究了丁苯羥酸對LTA4H活性的特異性抑制及其抑制作用位點，以及對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急

4、性肺損傷的保護(hù)作用，并從分子水平上驗證了丁苯羥酸對急性肺損傷的保護(hù)作用與抑制核因子（Nuclear factorκB,NF-κB）信號通路和絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen activated protein kinase,MAPK）信號通路中關(guān)鍵蛋白活化的相關(guān)性。
　　本論文的主要研究內(nèi)容和研究結(jié)果如下：
　?、盼覀冊贚TA4H抑制劑高通量篩選平臺上對已上市藥物庫進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)丁苯羥酸可以作為一種LTA4H抑制劑，并對L

5、TA4H-Bufexamac復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了X-射線衍射解析。發(fā)現(xiàn)丁苯羥酸能與LTA4H的L型狹窄活性口袋結(jié)合，即丁苯羥酸的羰基和羥基特異性地與LTA4H的活性位點中的三個關(guān)鍵氨基酸殘基（Glu296,Glu318和Tyr383）和Zn2+結(jié)合,這一結(jié)果為闡明丁苯羥酸特異性抑制LTA4H活性的分子機(jī)制提供了證據(jù)。
　?、评肊LISA法和細(xì)胞遷移侵襲試驗，檢測了丁苯羥酸對中性粒細(xì)胞中LTB4合成和對中性粒細(xì)胞趨化的影響。發(fā)現(xiàn)丁

6、苯羥酸是通過抑制LTA4H進(jìn)而有效地抑制LTB4的產(chǎn)生和中性粒細(xì)胞趨化。
　?、墙⒘酥嗵牵↙ipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型，研究了丁苯羥酸對小鼠ALI的保護(hù)作用。證明了丁苯羥酸可以抑制LPS誘導(dǎo)ALI的NF-κB的過度活化，并參與阻斷MAPK信號通路中三個關(guān)鍵蛋白激酶（p38MAPK、ERK、JNK）的磷酸化，從而對LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷具有保護(hù)作用。
　?、冗\用計算機(jī)輔助藥物設(shè)