6-姜烯酚通過NF-κB途徑對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠的保護作用機制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 6-姜烯酚對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺泡毛細血管通透性的影響
　　目的：
　　研究6-姜烯酚(6-shogoal，6-SH)對脂多糖(Lipopolysac-charide，LPS)誘導的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡毛細血管通透性的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸

2、動脈放血處死動物。檢測每組動物支氣管肺泡灌洗液(BALF)中總細胞數(shù)，中性粒細胞百分比，白蛋白濃度，檢測肺組織濕重與干重比(W/D)。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，實驗組之間的比較采用Dunnet T檢驗，檢驗水準α=0.05，p≤0.05認為差異有統(tǒng)計學意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結果：
　　(1)BALF總細胞數(shù):Dunnett方差分析顯示，與NS相比，L組BALF總細胞數(shù)增多，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01

3、)，與L組相比，6-SH組和DEX組BALF中總細胞數(shù)降低(p＜0.01)。
　　(2)BALF中性粒細胞數(shù)百分比:與NS組比較，L組BALF中性粒細胞數(shù)百分比升高(p＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組BALF中中性粒細胞數(shù)百分比降低(p＜0.01);
　　(3)BALF白蛋白濃度:與NS組比較，L組BALF白蛋白濃度升高(P＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組BALF中白蛋白濃度降低(p＜0.01)，

4、差異有顯著性。
　　(4)W/D:與NS組比較，L組肺組織W/D升高(P＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組W/D降低(P＜0.01)。
　　結論：
　　6-姜烯酚能夠減輕LPS誘導的ALI，其部分機制可能與抑制中性粒細胞浸潤、降低肺泡毛細血管通透性、減輕肺水腫有關，其效果與激素的抗炎作用相似。
　　第二部分 6-姜烯酚對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響
　　目的：
　　研

5、究6-姜烯酚對脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動脈放血處死動物。每組動物檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細胞介素-6(IL-6)的濃度。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準

6、差表示，實驗組之間的比較采用Dunnet T檢驗，檢驗水準α=0.05，p≤0.05認為差異有統(tǒng)計學意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結果：
　　(1)TNF-a:與NS組比較，L組肺組織TNF-a濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織TNF-a濃度降低(P＜0.01)。
　　(2)IL-1β:與NS組比較，L組肺組織IL-1β濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組

7、肺組織IL-1β濃度降低(P＜0.01)。
　　(3)IL-6:與NS組比較，L組肺組織IL-6濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織IL-6濃度降低(P＜0.01)。
　　結論：
　　6-姜烯酚能夠抑制LPS誘導的ALI小鼠肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1β、IL-6濃度，其肺保護作用可能與抑制炎癥因子有關。
　　第三部分 6-姜烯酚對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺組織髓過氧化物酶(MP

8、O)活性及肺組織病理學變化的影響
　　目的：
　　研究6-姜烯酚對脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性及肺組織病理學變化的的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動脈放血處死動物。取部分肺組織進行病理切片染色，其余肺組織用來檢測肺組織勻漿中

9、髓過氧化物酶(MPO)活性，實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，實驗組之間的比較采用Dunnet T檢驗，檢驗水準α=0.05，p≤0.05認為差異有統(tǒng)計學意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結果：
　　病理所見:生理鹽水對照組表現(xiàn)為小鼠肺組織結構正常，細胞完整，肺泡腔清晰可見，肺泡間隔未見水腫及炎細胞浸潤。L組出現(xiàn)的肺損傷改變明顯:包括肺泡結構破壞、細胞破壞、肺泡壁嚴重水腫、肺間質部分增厚、肺泡腔滲出增多，大量炎性細胞浸潤、

10、血管充血、出血。6-SH組和DEX組，均有不同程度的肺損傷，但較L組損傷減輕，其肺泡組織結構尚可，肺間質和肺泡腔內滲出物較L組明顯減少，炎性細胞浸潤現(xiàn)象亦減輕。MPO:與NS組比較，L組肺組織MPO活性升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織MPO活性降低(P＜0.01)。
　　結論：
　　1、組織病理學檢查證實:6-姜烯酚能夠改善病理狀態(tài)下的肺組織，且成劑量依賴性。
　　2、6-姜烯酚的肺組織保護

11、作用可能與抑制MPO活性相關。
　　第四部分 6-姜烯酚對脂多糖誘導的急性肺損傷小鼠肺組織NF-κB信號通路的抑制作用
　　目的：
　　研究6-姜烯酚對脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺組織NF-κB信號通路的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動脈放血處死動

12、物。取部分肺組織液氮保存，用Western Blotting檢測肺組織NF-κB表達情況。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，實驗組之間的比較采用Dunnet T檢驗，檢驗水準α=0.05，p≤0.05認為差異有統(tǒng)計學意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結果：
　　L組肺組織細胞核內NF-κB p65含量顯著高于生理鹽水對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與L組相比，6-SH干預組肺組織細胞核內NF-κB p65含量下降

13、，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結論：
　　6-姜烯酚的肺組織保護作用可能與抑制NF-κB表達相關。
　　第五部分 6-姜烯酚與NF-κB分子對接蛋白構象分析
　　目的：
　　利用分子對接技術，研究受體-配體間相互的作用，通過對6-姜烯酚與NF-κB分子對接蛋白構象分析，評價6-姜烯酚對NF-κB信號通路的影響。
　　方法：
　　使用Discoveray Studi02.5新一代分子建

14、模和模擬環(huán)境軟件，基于形狀匹配的分子對接程序，采用模擬蒙特卡羅方法在LigandFit模塊中將6-姜烯酚與NF-κB分子的活性位點進行柔性對接，觀察配體結合取向、結合構象以及形狀匹配等多種表現(xiàn)。整個過程分為9步:(1)載入受體蛋白文件。(2)定義受體，在受體中搜索結合位點。(3)運行對接流程分析對接結果。(4)優(yōu)化對接poses。(5)配體對接pose的優(yōu)化。(6)對優(yōu)化后的對接poses重新打分。(7)分析優(yōu)化后重新打分的配體pose

15、。(8)運行一致性打分(Consensus Score)流程。(9)分析一致性打分結果。
　　結果：
　　6-SH與NF-κB的Lys145和Lys146氨基酸殘基末端結合，并且與Lys145之間產生交互作用。同時，6-SH能夠作用于深埋于NF-κB位于A鏈和B鏈之間的活性位點，它們是位于NF-κB p50 B鏈的深裂內層結構的氨基酸殘基Tyr57，Va158，Cys59，Tyr143，Lys145，Lys146。最終一致性