6-姜烯酚通過抑制TLR4-NF-κB途徑抑制VSMC遷移增殖.pdf

1、目的：
　　動(dòng)脈粥樣硬化是引起缺血性心臟病、腦卒中和外周血管病等高發(fā)病率和致死率疾病的首要原因，而血管內(nèi)膜增厚則是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要特征和早期的關(guān)鍵病理過程，血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)位于血管壁的中膜，VSMC遷移到內(nèi)膜并大量增殖是引起內(nèi)膜增厚的主要原因，因此抑制VSMC遷移增殖是早期預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化的重要手段。
　　Toll樣受體(Toll-like rec

2、eptors，TLRs)是一種高度保守的膜蛋白，TLRs的主要作用是介導(dǎo)宿主的自身免疫。TLR4是TLRs家族的一員，它在人體的多種細(xì)胞都有表達(dá)，比如氣道上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌和血管平滑肌細(xì)胞等。有研究發(fā)現(xiàn)，TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在VSMC遷移增殖過程中，占據(jù)著重要地位，LPS，TLR4的激動(dòng)劑，可以上調(diào)VSMC中TLR4表達(dá)，并誘導(dǎo)VSMC遷移、增殖，而使用E5564則可以明顯抑制TLR4表達(dá)，并抑制VSMC的遷移和增殖

3、。
　　6-姜烯酚（6-shogaol，6S）是干姜中活性很高的一種提取物。有研究發(fā)現(xiàn)，在胰腺癌中，6-姜烯酚可以抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖與遷移，而其機(jī)制就是抑制TLR4/NF-κB通路的表達(dá)。在VSMC中，TLR4/NF-κB是VSMC遷移和增殖中的重要通路，因此我們推測(cè)，在動(dòng)脈粥樣硬化過程中，6-姜烯酚可以通過可抑制VSMC的遷移和增殖抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，而其機(jī)制很可能與抑制TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān)。
　　為了證實(shí)以上

4、的假設(shè)，我們使用6-姜烯酚對(duì)VSMC進(jìn)行處理，然后觀察其遷移以及增殖的情況，并檢測(cè)TLR4的表達(dá)情況，以此來探討6-姜烯酚在VSMC遷移與增殖過程中的可能作用。我們的實(shí)驗(yàn)分為以下幾個(gè)部分:一:檢測(cè)TLR4及其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在VSMC遷移增殖中的作用;二:探索6-姜烯酚對(duì)VSMC遷移增殖的作用以及在這個(gè)過程中其對(duì)TLR4及其下游信號(hào)的影響;
　　方法：
　　1.使用組織塊貼塊法來培養(yǎng)野生型（Wild type，C57BL/6J

5、背景）小鼠原代VSMC，用細(xì)胞免疫熒光染色法對(duì)VSMC進(jìn)行鑒定。
　　2.采用Western Blot法檢測(cè)蛋白TLR4、β-actin及NF-κB的表達(dá)。
　　3.用MMT法測(cè)定細(xì)胞增殖率，使用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移率。
　　結(jié)果：
　　1.原代培養(yǎng)出小鼠原代VSMC，免疫熒光鑒定。
　　2.PDGF和LPS均可激活TLR4并促進(jìn)野生VSMC的遷移(P＜0.05)與增殖(P＜0.05)，TLR

6、4基因敲除抑制PDGF和LPS誘導(dǎo)的VSMC遷移(P＜0.05)與增殖(P＜0.05)。
　　3.6-姜烯酚呈濃度依賴性地抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMC的遷移(P＜0.05）與增殖(P＜0.05)。
　　4.6-姜烯酚下調(diào)VSMC中TLR4表達(dá)(P＜0.05)，6-姜烯酚下調(diào)VSMC中TLR4下游蛋白NF-κB的表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　6-姜烯酚通過下調(diào)TLR4/NF-κB通路抑制血管平滑肌細(xì)胞遷移與