烏司他丁對大鼠急性肺損傷肺組織NF-κB表達的影響及其肺保護作用.pdf

1、背景： 急性肺損傷(ALI)是現(xiàn)代危重病醫(yī)學的一大難題，若不能得到及時有效的治療，往往會發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)，嚴重危及患者生命，并耗費大量的醫(yī)療資源。ALI通常繼發(fā)于嚴重感染、膿毒癥、戰(zhàn)傷、多發(fā)傷、誤吸、大量輸血、缺血再灌注損傷等臨床常見的急危重病癥，是一種臨床常見病、多發(fā)病。各種致病因素引起以多形核中性粒細胞(PMN)為主的炎性細胞在肺微血管大量積聚、浸潤，過度表達和釋放大量炎癥介質，如TNF-α、IL-6、I

2、L-8、ICAM-1、氧自由基等，使肺泡膜受損，通透性增加而導致ALI的發(fā)生。NF-κB在調控多種參與ALI的炎癥介質的基因表達上起著重要作用，NF-κB活化與ALI的發(fā)生有密切關系，國內外的許多基礎和臨床研究業(yè)已證明了這一點。如何有效抑制NF-κB活化，避免炎癥反應“級聯(lián)放大”，從而引發(fā)ALI甚至ARDS，是一個尚未解決的難題。盡管目前臨床上有各種各樣的治療手段，動物實驗也在進行各種新的治療方法的研究，但仍未有突破性進展。理想的有效治

3、療似乎應圍繞抑制NF-κB活化和抑制。PMN積聚、浸潤和損傷肺血管內皮細胞這兩個關鍵點展開。 烏司他丁(UTI)是一種廣譜蛋白酶抑制劑，能抑制多種蛋白、糖和脂類水解酶的活性，減少炎性介質的過度釋放，改善微循環(huán)和組織灌注。烏司他丁對ALI時肺組織TNF-a和MPO的升高有抑制作用，能明顯改善肺泡膜炎性細胞浸潤、水腫及出血癥狀。在發(fā)生ALI后，早期抑制NF-κB活性可減輕肺損傷。烏司他丁是否通過抑制NF-κB活化，從而抑制炎癥介質過

4、度釋放和PMN浸潤，發(fā)揮肺保護作用，目前還不清楚。為此我們設計了本實驗，以期明確烏司他丁治療ALI的分子生物學機制，為臨床治療性應用提供理論依據(jù)。 研究內毒素誘導大鼠急性肺損傷時，烏司他丁對肺組織NF-κB活性、TNF-α蛋白表達的影響，對肺組織髓過氧化物酶和丙二醛活性的影響，以及對肺泡毛細血管基膜通透性的影響，探討烏司他丁對ALI的治療效果及其作用機制。 方法： 1.選取健康雄性SD大鼠36只，體質量180～2

5、00g，隨機分為3組：健康對照組12只(NC組)，肺損傷組12只(LPS組)，烏司他丁治療組12只(UTI組)。依文獻復制大鼠ALI模型：3％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉后，股靜脈緩慢注射LPS 5 mg/kg。治療組在注射完LPS后，繼續(xù)由股靜脈注入烏司他丁50,000u/kg，對照組注入等量生理鹽水。各組分別于注射后2h、4h經(jīng)頸動脈放血處死6只動物，取出肺組織進行相關指標檢測。 2.通過測定PaO<,2>、肺組織濕

6、/干質量比值、HE染色下肺組織病理檢查結果，評價肺損傷的程度和烏司他丁的治療效果。 3.分光光度比色法測定肺組織勻漿中MPO、MDA的含量；ELISA法測定肺組織TNF-a蛋白含量；免疫組化法測定肺組織NF-κB的表達。 結果： 1.與空白對照組比較，內毒素損傷組出現(xiàn)了明顯的肺損傷：PaO<,2>明顯下降(97.46±6.16mmHg vs 135.80±5.30mmHg，P<0.01)、肺組織濕/干質量比值明顯

7、增高(5.46±0.37 vs 4.48±0.20，P<0.01)，HE染色下肺組織病理檢查結果顯示肺組織小葉結構紊亂，肺泡間隔明顯增厚，間質明顯水腫，大量炎性細胞浸潤，大量肺泡萎陷不張或呈肺氣腫樣改變，肺泡腔可見明顯出血、滲出；烏司他丁治療組也存在PaO<,2>下降、肺組織濕/干質量比值增高和間質水腫、滲出，但程度較損傷組輕。 2.肺組織勻漿中的MPO、MDA含量測定結果顯示，內毒素損傷組MPO、MDA 含量較空白對照組明顯升

8、高(P<0.01)，烏司他丁治療組MPO、MDA含量較損傷組低(P<0.05)，但仍明顯高于空白對照組(P<0.01)。 3.內毒素損傷組的 TNF-α蛋白含量、NF-κB表達量最高，烏司他丁治療組其次，空白對照組僅有少量表達。NF-κB的表達在2h最高，在4h仍處于較高的水平，TNF-α含量也呈現(xiàn)相似的變化。 結論： 1.內毒素誘發(fā)大鼠ALI時，肺組織遭受了明顯的損傷，PaO<,2>明顯下降、肺組織濕/干質量比

9、值明顯增高，肺泡膜遭到破壞，間質明顯水腫，大量炎性細胞浸潤、滲出，TNF-a蛋白含量、NF-κB表達量均出現(xiàn)了明顯升高。 2.烏司他丁能減輕ALI時肺組織的損傷程度，可維持較高的動脈血氧分壓，并能在一定程度上抑制PMN活化，減少PMN在肺部積聚、浸潤、滲出，減少脂質過氧化產(chǎn)物的生成，起到比較明確的肺保護作用。 3.烏司他丁能有效減少ALI時肺組織TNF-a蛋白含量和NF-κB的表達量，通過抑制NF-κB的活化和炎性細胞因