烏司他丁聯(lián)合維拉帕米對(duì)大鼠急性肺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、 目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠急性肺缺血再灌注損傷(the acute lung isc hemia reperfusion injury,TALIRI)模型,對(duì)聯(lián)合應(yīng)用烏司他丁和維拉帕米對(duì)大鼠急性肺缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制做初步實(shí)驗(yàn)研究。方法：1.建立大鼠急性肺缺血再灌注損傷模型：取健康清潔大鼠(S D)90只,體重200~240g,隨機(jī)分為未阻斷組(A組),缺血再灌注組(B組),烏司他丁預(yù)處理組(C組),維拉帕米預(yù)處理組(D

2、組),以及烏司他丁聯(lián)合維拉帕米預(yù)處理組(E組),每組18只。A組：開(kāi)胸后不阻斷肺門：B組：開(kāi)胸阻斷肺門45min后放開(kāi)放再灌注；C組：開(kāi)胸前15mi n尾靜脈注射烏司他丁,余處理同B組；D組：開(kāi)胸前15min尾靜脈注射維拉帕米,余處理同B組；E組：分別在開(kāi)胸前15min尾靜脈注射烏司他丁與維拉帕米,余處理同B組。分別在缺血后45min、2小時(shí)及6小時(shí)3個(gè)時(shí)相點(diǎn)各處死6只大鼠,留取左肺標(biāo)本； 2.在缺血45min、2小時(shí)及6小時(shí)3個(gè)時(shí)相點(diǎn)

3、分別取左下肺組織天枰稱重后計(jì)算濕干重比；取左上肺組織進(jìn)行病理學(xué)觀察,測(cè)定左上肺組織勻漿中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓過(guò)氧化物酶(MPO)含量、一氧化氮(NO)活性及免疫組化檢測(cè)肺泡表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白-A(SP-A)的表達(dá)水平。結(jié)果：1.左下肺干濕重比(W/D)：A組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為3.74±0.20%、3.70±0.19%、3.30±0.50%, B組缺血45m

4、in、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為6.40±0.42%、6.33±0.40%、5.37±0.41%,C組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為4.90±0.55%、4.50±0.32%、4.61±0. 71%,D組缺血45min、再2h、再灌注6h左下肺組織W/D比值分別為4.89 ±0.47%、4.52±0.22%、4.64±0.64%,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h左下肺組織

5、W/D比值分別為 4.55±0.32%、4.10±0.45%、4.86 ±0.43%。B組W/D高于A組(P0.05)。2.左上肺組織病理學(xué)觀察結(jié)果：A組缺血45min、2h、6h組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰肺泡完整,肺泡無(wú)充血水腫、無(wú)炎性滲出等改

6、變,組間病理形態(tài)評(píng)分無(wú)顯著性差異。B組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織均見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)表現(xiàn)等,以2h最明顯。C組、D組、E組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺萎縮。3.左上肺組織 MDA 濃度測(cè)定：A 組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MDA濃度分別為0.96±0.12nmol/mgprot、0.98±0.25nmol/mgprot、1.14±0.21nmol/mgprot,B組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注 6h 肺組織

7、MDA 濃度分別為 1.78 ± 0.16nmol/mgprot、1.80 ± 0.19nmol/mgprot、1.88 ± 0.22nmol/mgprot,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MDA濃度分別為 1.08±0.17nmol/mgprot、1.12±0.09nmol/mgprot、1.20 ±0.16nmol/mgprot。?B組、C組、D組、E組不同時(shí)間點(diǎn)MDA濃度比A組明顯降低(p<0.05),C組、D組、

8、E組不同時(shí)間點(diǎn)MDA濃度比B組明顯降低(p

9、2±2.35 U/mgprot、33.10±1.33 U/mgprot,E組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織SOD活性分別為 54.31±5.84U/mgprot、55.29±2.23U/mgprot、55.87±2.45U/mgprot。B組、C組、D組、E組不同時(shí)間點(diǎn)SOD濃度比A組明顯降低(p<0.05),C組、D組、E組不同時(shí)間點(diǎn)SOD活性比B組明顯升高(p

10、0.05)。5.左上肺組織MPO活性測(cè)定：A組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MPO活性分別為 0.66 ±0.10 U/g、0.67±0.10U/g、0.73±0.11U/g,B組缺血45min、再灌注2h、再灌注6h肺組織MPO活性分別為0.82±0.05U/g、0.96± 0.12U/g、1.00±0.05U/g,E 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注 6h肺組織 MPO 活性分別 0.70 ± 0.05U/g

11、、0.76 ± 0.10U/g、0.79 ± 0.04U/g。B組、C組、D組、E組不同時(shí)間點(diǎn)MPO活性與A組比較明顯增高(p<0.05)。B組不同時(shí)間點(diǎn)MPO活性比C組、D組、E組組明顯升高(p

12、8±0.14μmol/L,B 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注6h肺組織NO活性分別為0.49±0.19 μmol/L、0.54±0.15 μmol/L、0.60±0.14μmol/L,E 組缺血 45min、再灌注 2h、再灌注6h肺組織NO活性分別為0.74±0.17μmol/L、0.70±0.09μmol/L、0.88±0.17μmol/L。B組、C組、D組、E組不同時(shí)間點(diǎn)NO活性與A組比較明顯降低(p<0.05),B組不

13、同時(shí)間點(diǎn)NO活性比C組、D組、E組組降低更明顯(p0.0

14、5)。結(jié)論：1.烏司他丁組與維拉帕米組聯(lián)合治療組的MDA含量、MPO活性比B組、C組、D組降低,SOD活性、NO活性比B組、C組、D組顯著增高,起到保護(hù)肺組織的作用。進(jìn)一步證實(shí)了MDA含量 、MPO活性增高、SOD活性、NO活性的水平降低與肺缺血再灌注損傷有關(guān)。2.在肺缺血再灌注損傷前聯(lián)合應(yīng)用烏司他丁和維拉帕米能保護(hù)大鼠肺分泌PS的功能從而減輕肺損傷。3.單獨(dú)使用烏司他丁、維拉帕米與缺血再灌注組相比,均可減輕肺組織損傷,對(duì)肺臟起一定的保