烏司他丁對新生鼠急性肺損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的： 烏司他丁(Ulinastain，UTI)是從人尿中提取出來的一種蛋白酶抑制劑，具有抑制白細(xì)胞聚集，抑制白細(xì)胞釋放蛋白酶、穩(wěn)定溶酶體膜、抑制過量超氧化物的生成和清除產(chǎn)生的超氧化物、清除氧自由基、抑制炎癥介質(zhì)釋放等特殊的藥理作用。脂多糖(lipopolysacharide,LPS)是革蘭氏陰性桿菌內(nèi)毒素的主要成分，常被用來制備動(dòng)物的急性肺損傷的模型。本試驗(yàn)通過腹腔內(nèi)注射LPS建立新生大鼠急性肺損傷模型，同時(shí)通過腹腔內(nèi)注射烏司

2、他丁進(jìn)行干預(yù)，測定腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis facter-α，TNF-α) 、白介素 -8(interleukin-8，IL-8)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase,MMP-9 ) 、髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物岐化酶(superoxidase,SOD)，比較烏司他丁對上述指標(biāo)的影響，探尋烏司他丁

3、對新生大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制，為臨床研究新生兒急性肺損傷后的治療提供理論依據(jù)方法： 新生大鼠ALI模型制備：健康7日齡新生SD大鼠共30只，體重在15g-20g之間，體重問比較無差異，雌雄不拘，隨機(jī)分組，分對照組、致傷組、干預(yù)組。LPS 3mg/Kg腹腔內(nèi)注射，干預(yù)組同時(shí)給予腹腔內(nèi)注射烏司他丁10萬U/Kg進(jìn)行干預(yù)。四小時(shí)后腹腔內(nèi)麻醉處死新生大鼠。觀察新生大鼠的肺臟的病理變化，測定肺組織濕重/干重比值(wetweigh

4、t/dry weight，W/D)，測定肺組織中MDA的含量及MPO、SOD的活力，用放射免疫法測定肺組織勻漿中TNF-α、IL-8含量，用免疫組化法檢測MMP-9在肺組織的表達(dá)。 結(jié)果 1 肺組織大體所見：大體觀察對照組肺臟呈粉紅色，無充血、水腫及梗死灶。致傷組肺呈暗紅色，肺體積增大，明顯充血、水腫，可見點(diǎn)片狀出血，干預(yù)組充血、水腫較致傷組輕，可見點(diǎn)狀出血。光鏡檢查：致傷組肺泡腔明顯變窄，肺泡和肺間質(zhì)水腫，肺間質(zhì)和肺

5、泡腔內(nèi)有較多量的出血，肺泡壁明顯增厚，肺泡壁毛細(xì)血管內(nèi)有淤血，間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤。UTI干預(yù)組上述病理變化較致傷組較輕。 2 肺損傷組織病理評分：對照組肺損傷組.織病理評分為0分，致傷組肺損傷組織病理評分為2.5±0.3，UTI干預(yù)組肺損傷組織病理評分為2.2±0.2，與對照組相比致傷組肺損傷組織病理評分明顯升高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺損傷組織病理評分顯著降低(P<0.05) 3 肺組織W/D：

6、對照組肺W/D為4.95±0.44，致傷組肺W/D為5.62±0.57.，UTI干預(yù)組肺W/D為5.40±0.39，與對照組相比致傷組肺W/D明顯增高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺組織W/D明顯降低(P<0.05)。 4 肺組織MDA：對照組肺組織MDA為8.20±0.92nmol/mg prot，致傷組肺組織。MDA為11.14±1.62 nmol/mgprot，UTI干預(yù)組肺組織MDA為9.50±1.5 1nm

7、ol/mg prot，與對照組相比致傷組肺組織：MDA明顯增高fP<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺組織MDA明顯降低(P<0.05) 5 肺組織中 SOD：對照組SOD的活力為91.93±4.36NU/mg prot，致傷組 SOD 的活力為52.50±3.3 1NU/mg prot，UTI干預(yù)組SOD的活力為59.54±2.27NU/mg prot，與對照組相比致傷組肺組織SOD的活力明顯降低(P<0.05)，與致傷

8、組相比UTI干預(yù)組肺組織SOD的活力顯著升高(P<0.05)。 6 肺組織中TNF-α水平：對照組肺組織中TNF-α為57.07±8.94pg/ml，致傷組肺組織中 TNF-α為220.90±15.15pg/ml，UTI干預(yù)組肺組織中TNF-α為199.96±20.85pg/ml，與對照組相比致傷組肺組織中TNF-α水平明顯升高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺組織中TNF-α水平顯著降低(P<0.05)。

9、7 肺組織中IL-8水平變化：對照組肺組織中IL-8為0.43±0.17pg/ml，致傷組肺組織中IL-8為1.32±0.22pg/ml，UTI干預(yù)組肺組織中IL-8為1.06±0.19pg/ml，與對照組相比致傷組肺組織中IL-8水平明顯升高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺組織中IL-8水平顯著降低(P<0.05)。 8 肺組織MPO：對照組肺組織MPO為0.97±0.46u/g，致傷組肺組織MPO9.72±3.

10、8lu/g，UTI干預(yù)組肺組織MPO6.39±2.73u/g，與對照組相比致傷組肺組織MPO明顯增高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組肺組織MPO明顯降低(P<0.05)。 9 肺組織MMP-9表達(dá)強(qiáng)度用IOD表示：對照組大鼠肺組織MMP-9表達(dá)強(qiáng)度為3.71×10<'-4>±0.90×10<'-4>，致傷組5.83×10<'4>±1.28×10<'-4>，UTI干預(yù)組大鼠肺組織MMP-9表達(dá)強(qiáng)度4.78×10<'-4>

11、±1.05×10<'-4>，與對照組相比致傷組新生大鼠肺組織MMP-9表達(dá)強(qiáng)度明顯升高(P<0.05)，與致傷組相比UTI干預(yù)組大鼠肺組織MMP-9表達(dá)強(qiáng)度顯著降低(P<0.05)。 結(jié)論： 廣譜蛋白酶抑制劑．烏司他丁對ALI進(jìn)行干預(yù)，可以抑制機(jī)體炎性細(xì)胞因子TNF—a、IL-8的產(chǎn)生，保持SOD的活力，降低MDA的水平，減少氧自由基的生成，降低白細(xì)胞釋放MMP-9、MPO減輕了白細(xì)胞對肺組織的損傷，從而產(chǎn)生了對ALI時(shí)