LncRNA NBAT1對膀胱癌5637細胞生物學行為的影響及其慢病毒載體的構建.pdf

1、目的：檢測長鏈非編碼RNA成神經細胞瘤相關轉錄本1（neuroblastoma associated transcript1，NBAT1）在人膀胱癌細胞株中的表達情況，并探討NBAT1基因表達下調對膀胱癌5637細胞生物學行為的影響。通過構建shRNA慢病毒載體進一步研究NBAT1基因在膀胱癌細胞中具體功能及相關機制。
　　方法：采用實時熒光定量PCR法檢測7種膀胱癌細胞株（RT4、5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和

2、UM-UC-3）中NBAT1mRNA的表達水平，分析其與膀胱癌細胞惡性程度的關系。將靶向NBAT1基因的特異性siRNA轉染膀胱癌5637細胞，實時熒光定量PCR法檢測NBAT1基因的表達變化。然后，分別采用CCK-8法、細胞劃痕愈合實驗、Hoechst染色法以及Transwell遷移和侵襲實驗檢測并分析NBAT1基因表達下調對膀胱癌5637細胞增殖活力、遷移、侵襲及順鉑誘導后細胞凋亡的影響。構建NBAT1基因和陰性對照慢病毒shRNA

3、載體，將其包裝成病毒顆粒，進而感染目的細胞。
　　結果：NBAT1在惡性程度較低的膀胱移行細胞乳頭瘤細胞RT4中的表達水平明顯高于惡性程度較高的膀胱移行上皮癌細胞5637、EJ、J82、TCC-SUP、T24和UM-UC-3（P值均＜0.01）。特異性siRNA轉染膀胱癌5637細胞后，NBAT1基因表達被明顯抑制（P＜0.01），5637細胞的增殖活力、遷移及侵襲能力均明顯增強（P值均＜0.01），然而順鉑誘導的5637細胞凋亡