反膠束體系在酶法測定和生物分離中的應用研究.pdf

1、反膠束是表面活性劑分散于連續(xù)有機相中自發(fā)形成的與正常膠束結(jié)構(gòu)相反的一種含水聚合體。由于反膠束體系能較好地模擬酶的天然環(huán)境，因而大多數(shù)酶能保持催化活性和穩(wěn)定性。反膠束酶系統(tǒng)在生物反應中的催化作用研究取得了較大進展，眾多實驗室對該體系中酶的定位和結(jié)構(gòu)、酶的動力學特征、催化活性和穩(wěn)定性等方面的理論研究，為進一步拓寬反膠束技術(shù)的應用領域打下了良好基礎。 當含反膠束的有機溶劑和蛋白質(zhì)水溶液接觸時，蛋白質(zhì)在幾種作用力(靜電、親和、疏水)的

2、協(xié)同作用下進入極性核中，然后再調(diào)節(jié)適當?shù)臈l件，使蛋白質(zhì)從負載有機相重新反萃取到水相中，以達到純化的目的。反膠束萃取是一種溶劑萃取，具有樣品處理量大、容易放大和可連續(xù)操作的特點，反膠束內(nèi)的環(huán)境接近細胞內(nèi)的環(huán)境，蛋白質(zhì)不易變性。反膠束萃取還具有成本低、溶劑可反復使用、萃取率和反萃取率都很高的優(yōu)點。因此，反膠束萃取技術(shù)為蛋白質(zhì)的分離純化開辟了一條具有工業(yè)開發(fā)前景的新途徑。 第一章概述了酶分析法和反膠束技術(shù)的基本理論和應用。

3、 第二章研究了反膠束溶液中乳酸脫氫酶(LDH)的催化動力學性質(zhì)，試驗了含水量、表面活性劑和助溶劑用量對酶進入反膠束的影響。討論了溫度、pH等因素對酶活力的影響，并考察了LDH的熒光光譜。 第三章研究了十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)-辛烷-己醇反膠束體系固定化醇脫氫酶(ADH)的制備及應用?？疾炝撕?、CTAB和正己醇用量對于ADH固定化的影響。對游離酶和固定化酶的催化動力學性質(zhì)研究表明：酶促反應的最適pH值分別為8.2和8

4、.8，最適溫度分別為31℃和20℃，對乙醇的米氏常數(shù)Km分別為12 mmol/L和7.4 mmol/L。30℃時，游離酶存放150 min后失活90％，固定化酶失活50％，表明反膠束固定化ADH有較好的熱穩(wěn)定性。并應用此體系測定了試樣中乙醇的含量。 第四章探討了反膠束體系萃取酵母ADH，在此萃取體系中，以CTAB作為表面活性劑，異辛烷和戊醇作為溶劑和助溶劑。試驗了表面活性劑及助溶劑濃度、初始水相pH值對萃取的影響。詳細討論了反