柱前衍生法測定多胺含量的研究及其在海洋生物樣品中的應(yīng)用.pdf

1、多胺廣泛存在于生物體內(nèi),在生理pH下,多胺呈高密度的正電荷,能與帶有大量負(fù)電荷的核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子結(jié)合,能夠參與基因表達(dá)、翻譯的調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖和信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞膜的穩(wěn)定等生理活動(dòng)過程。多胺與人體健康息息相關(guān),它的主要來源是食物,所以食品中多胺的檢測對(duì)于人們的健康具有重要的意義,精脒和精胺的含量是常被檢測的對(duì)象。
　　 常用的多胺檢測方法是柱前衍生-熒光檢測,本文以精脒為例,研究了精脒與常用的幾種熒光試劑的衍生反應(yīng)條件,并選

2、擇較佳的實(shí)驗(yàn)方案測定了海帶、海蜇中的精脒和精胺含量。課題研究的主要內(nèi)容包括以下四個(gè)部分:
　　 (1)丹磺酰氯作為柱前衍生試劑與精脒進(jìn)行反應(yīng),考察了衍生劑的用量、緩沖溶液的pH值、衍生溫度等因素對(duì)衍生反應(yīng)的影響,確定了最佳反應(yīng)和HPLC條件:70℃水浴中避光反應(yīng)反應(yīng)30 min,使用pH=10的碳酸鈉-碳酸氫鈉作為緩沖溶液,甲苯萃取反應(yīng)液后氮?dú)獯蹈?甲醇溶解,HPLC流動(dòng)相使用甲醇:水=80:20保持3 min,從3 min到1

3、4 min,甲醇比率由80％梯度增至100%。此法SPD的工作曲線Y=0.081.36+0.3807 X,線性相關(guān)系數(shù)R=0.9991,衍生物保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%,峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.37%,儀器檢出限0.0924pmol。
　　 (2)研究了9-氯甲酸芴甲酯與精脒反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件并進(jìn)行了優(yōu)化,確定了最佳衍生條件:40℃水浴反應(yīng)10 min,pH=8的硼酸鈉作為緩沖溶液,反應(yīng)液不需處理,直接進(jìn)樣HPLC分析,甲

4、醇:水=95:5做流動(dòng)相。此法工作曲線Y=1.014+21.649X,R=0.9999,檢出限6.60×10-4 pmol。衍生物保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15%,峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.42%。
　　 (3)以鄰苯二甲醛-巰基乙醇作為衍生體系進(jìn)行精脒的衍生反應(yīng),pH=8的硼酸鈉作緩沖溶液,室溫條件下振搖反應(yīng)60 s為最佳衍生條件。反應(yīng)液直接HPLC分析,使用甲醇:水(水、磷酸、三乙胺體積比360:9:6)=90:10作為流