EMT相關(guān)蛋白和hTERT在成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義.pdf_第1頁(yè)
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1、成釉細(xì)胞瘤是常見(jiàn)的發(fā)生于頜骨內(nèi)的牙源性上皮來(lái)源的腫瘤,世界各地均有發(fā)病報(bào)道,發(fā)病率占所有牙源性腫瘤的11%-18%。成釉細(xì)胞瘤多為良性病變,但具有頜骨內(nèi)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和易復(fù)發(fā)的生物學(xué)特性,造成頜骨嚴(yán)重破壞,腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)特性決定了手術(shù)往往需要擴(kuò)大切除頜骨組織,造成患者生活質(zhì)量下降。依據(jù)臨床及放射線特征和組織病理學(xué)特征,成釉細(xì)胞瘤分為實(shí)性/多囊型、單囊型、外周型和促結(jié)締組織增生型。實(shí)型/多囊型最為常見(jiàn),包括濾泡型和叢狀型兩大主要類型,又包括

2、棘皮瘤亞型、顆粒細(xì)胞亞型和基底細(xì)胞型等變異類型。有研究表明,濾泡型的侵襲性和復(fù)發(fā)性稍高于其他組織學(xué)分型,而單囊型的復(fù)發(fā)性較低,??刹捎帽J氐耐饪菩g(shù)式進(jìn)行治療。目前對(duì)于成釉細(xì)胞瘤的腫瘤形成機(jī)制和侵襲性機(jī)制尚不完全明確。
  侵襲性是指細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞間和細(xì)胞外基質(zhì)的屏障遷移至鄰近組織,這一過(guò)程有多種基因及其產(chǎn)物的表達(dá)/激活參與。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是上皮細(xì)胞喪失其極性和黏附性而具有間質(zhì)細(xì)胞特性,運(yùn)動(dòng)遷移能力增強(qiáng),抗凋亡能力增強(qiáng)。許多研

3、究表明,EMT在腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制中具有重要作用。多條信號(hào)通路包括TGF-beta,F(xiàn)GF,EGF,HGF,Wnt/beta-catenin and Notch以及氧化應(yīng)激都參與EMT的發(fā)生。E-cadherin是維持上皮細(xì)胞之間相互連接,保持上皮表型的重要黏附分子,E-cadherin減少或丟失是EMT發(fā)生的關(guān)鍵事件。Vimentin是中間絲的一種蛋白,主要分布于間質(zhì)細(xì)胞中,如出現(xiàn)在上皮源性腫瘤中則是EMT的表現(xiàn),與細(xì)胞的生長(zhǎng)

4、分化狀態(tài)以及細(xì)胞游走遷移有關(guān)。Wnt家族信號(hào)在胚胎發(fā)育及組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)中調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞極性,該通路異常激活會(huì)促進(jìn)腫瘤發(fā)生。Beta-catenin作為Wnt通路的關(guān)鍵因子參與多種細(xì)胞過(guò)程包括細(xì)胞的黏附、生長(zhǎng)、分化;同時(shí)與E-cadherin分子的胞漿內(nèi)部分形成復(fù)合物參與細(xì)胞間連接,復(fù)合物結(jié)構(gòu)破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏附下降,侵襲和遷移能力增高。
  端粒是真核生物染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)(TTAGGG)n,具有維持染色體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,防止染色體

5、降解、重組、融合及染色體結(jié)構(gòu)基因丟失的作用。端粒隨著體細(xì)胞有絲分裂逐漸縮短,最終導(dǎo)致細(xì)胞衰老凋亡。端粒結(jié)構(gòu)異常則會(huì)導(dǎo)致染色體末端發(fā)生融合及重組,增加基因的不穩(wěn)定性。端粒酶催化端粒的合成并維持其長(zhǎng)度。正常成人體細(xì)胞中幾乎不表達(dá)端粒酶活性,在大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中都有端粒酶的表達(dá)。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)端粒酶活性的決定性因素,多種轉(zhuǎn)錄因子及信號(hào)通路、表觀遺傳學(xué)修飾參與hTERT表達(dá)的調(diào)控。有研究表明,hTERT啟動(dòng)子區(qū)有Wnt/β-C

6、atenin通路的作用靶點(diǎn),在腫瘤形成中發(fā)揮作用。
  目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究E-cadherin、Vimentin和β-catenin在成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)變化初步探討成釉細(xì)胞瘤的侵襲性生長(zhǎng)中是否存在EMT,并對(duì)hTERT在成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況及臨床相關(guān)性進(jìn)行分析,初步探討成釉細(xì)胞瘤中hTERT的甲基化調(diào)控機(jī)制。
  方法:本研究收集2004-2011年中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院外科手術(shù)切除的人成釉細(xì)胞瘤、鱗狀細(xì)胞癌的組織標(biāo)本

7、和存檔蠟塊,正??谇火つ?lái)自于下頜第三磨牙拔除術(shù)。腫瘤病例按照WHO(2005)頭頸部腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)及分類由兩位以上病理醫(yī)師進(jìn)行診斷分型。1、利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)臨床組織標(biāo)本中E-cadherin、Vimentin、β-catenin和hTERT在組織中的定位及表達(dá)情況。2、免疫印跡方法檢測(cè)臨床標(biāo)本中E-cadherin、Vimentin、β-catenin和hTERT的表達(dá)情況。3、利用RT-PCR方法檢測(cè)臨床標(biāo)本中hTERT mRN

8、A的表達(dá)。4、應(yīng)用亞硫酸鹽修飾DNA后擴(kuò)增測(cè)序法(BSP)檢測(cè)hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度。
  結(jié)果:1、免疫組化結(jié)果顯示成釉細(xì)胞瘤中E-cadherin在外周柱狀或立方狀上皮細(xì)胞膜表達(dá)降低或丟失,Vimentin主要在間質(zhì)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),在瘤上皮細(xì)胞也有陽(yáng)性表達(dá),E-cadherin與Vimentin的表達(dá)成負(fù)相關(guān)。同時(shí)β-catenin在上皮細(xì)胞膜表達(dá)有所下降,出現(xiàn)了細(xì)胞漿/細(xì)胞核異位表達(dá)。2、蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果表明,與正

9、??谇火つは啾?,E-cadherin和β-catenin在腫瘤上皮表達(dá)量有所下降,而Vimentin表達(dá)量升高。hTERT在成釉細(xì)胞瘤中表達(dá)量高于正常黏膜。3、免疫組化結(jié)果顯示,hTERT在正??谇火つぁ⒊捎约?xì)胞瘤、牙源性角化囊性瘤和口腔鱗癌中均有陽(yáng)性表達(dá),分別為28.6%、72.9%、75.6%、90.1%,表達(dá)情況存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。成釉細(xì)胞瘤原發(fā)和復(fù)發(fā)、不同病理分型hTERT表達(dá)水平均存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.0

10、5)。4、檢測(cè)了30例成釉細(xì)胞瘤標(biāo)本的hTERT啟動(dòng)子上游調(diào)控區(qū)21個(gè)CpG位點(diǎn),第5CpG位點(diǎn)甲基化程度最高100%(30/30),第15位點(diǎn)最低為50%(15/30)。
  結(jié)論:1、E-cadherin在成釉細(xì)胞瘤上皮中的表達(dá)量降低,伴隨間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達(dá)升高,β-catenin出現(xiàn)異位表達(dá),提示在成釉細(xì)胞瘤侵襲過(guò)程中存在EMT。2、hTERT在成釉細(xì)胞瘤中為陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)量高于正常黏膜組,且隨著腫瘤復(fù)發(fā)表達(dá)率升

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