染色體重組對大麥轉(zhuǎn)基因gfp遺傳表達的作用.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)為植物分子生物學基礎(chǔ)研究和作物遺傳改良等提供了新途徑，已成為植物生物技術(shù)的核心工具之一。然而利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在實驗室中獲得的新種質(zhì)材料不一定都能夠直接用于大規(guī)模的生產(chǎn)種植，因為外源基因在宿主內(nèi)能否穩(wěn)定遺傳和表達是影響轉(zhuǎn)基因植物應用前景的重要因素之一。 本試驗利用已獲得的5種轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因(gfp)大麥：熒光表達量分別由高表達到不表達的F株系、C株系、A株系、B株系、D株系(轉(zhuǎn)基因沉默株系)，以及非轉(zhuǎn)基因系(Igri)

2、為材料，對不同轉(zhuǎn)基因植株間以及轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因植株進行常規(guī)有性雜交，分別對不同世代雜交植株的花粉、葉片、根中轉(zhuǎn)基因gfp的表達量進行測定分析，得出以下結(jié)論：1.通過對根尖、葉片、花粉的分別測量發(fā)現(xiàn)，gfp基因在表達量上存在組織差異。2.通過對不同世代雜交植株進行熒光測量發(fā)現(xiàn)，gfp基因在雜交后代中以一個顯性基因穩(wěn)定傳遞，轉(zhuǎn)基因可通過常規(guī)的有性雜交進行傳遞。3.通過測交和自交等試驗發(fā)現(xiàn)，gfp基因在雜交后代中表達時存在明顯的劑量效應。

3、 為了探討D株系的沉默機制，本實驗以大麥Actin基因作為內(nèi)參，通過擴增大麥Actin基因并對其進行定量，達到保證擴增gfp基因的模板量一致的目的，這樣在PCR條件、模板量均一致且同批次反應的條件下，擴增各株系的gfp基因，通過凝膠電泳檢測各株系的g基因的轉(zhuǎn)錄水平。半定量RT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)gfp基因D系大麥以及未轉(zhuǎn)基因大麥均未擴增出gfp條帶，而A、B、C、F均擴增出gfp條帶，且F系擴增條帶較其他的株系擴增條帶亮，這與熒光檢