嗜酸氧化亞鐵硫桿菌外膜蛋白的快速有效分離及雙向電泳圖譜的建立.pdf

1、嗜酸氧化亞鐵硫桿菌是革蘭氏陰性、化能自養(yǎng)菌，能通過氧化Fe2+、各種還原性硫化物以及H2提供生長能量。外膜蛋白是嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的重要組成成分，在物質轉運、信息識別、細胞吸附等方面起著重要作用。外膜蛋白的分離是對其進行進一步研究的必要條件，但是傳統的分離方法耗時長、儀器設備要求高、步驟繁多，同時很難嚴格地將質膜蛋白與外膜蛋白區(qū)分開來。 本論文以大腸桿菌為模式菌，運用溫度誘導的雙水相萃取分離技術建立了一種快速、有效的分離革蘭氏陰

2、性細菌外膜蛋白的方法體系。系統地研究了不同濃度的Triton X-114對外膜蛋白提取效率的影響，結果表明8％的Triton X-114為外膜蛋白分離的合適濃度。為摸索Triton X-114的最佳處理時間，以8％的Triton X-114分別處理未經機械破碎的嗜酸氧化亞鐵硫桿菌1h、2h、3h、4h、5h，發(fā)現處理3h后外膜蛋白的提取效率達到最佳。分離得到的蛋白質樣品，經透析除鹽處理后，可用于雙向電泳分析。通過對比實驗發(fā)現雙向電泳樣品

3、裂解液中包含低濃度的Tris是外膜蛋白雙向電泳成功的關鍵，CHAPS與ASB-14或NP-40結合使用比單獨使用CHAPS效果更佳，可顯著提高外膜蛋白的溶解能力，增加蛋白斑點，縮短聚焦時間，從而優(yōu)化了外膜蛋白雙向電泳技術體系，建立了外膜蛋白雙向電泳圖譜。 采用優(yōu)化后的雙水相萃取分離體系選擇性分離了嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的外膜蛋白。對所分離到的蛋白質樣品進行了雙向電泳分析，并建立了不同能源基質培養(yǎng)條件下嗜酸氧化亞鐵硫桿菌外膜蛋白的雙向