黃芪保心湯及有效成分丹酚酸B對擴張型心肌病大鼠心肌纖維化和TGF-β-smad通路的影響.pdf

1、擴張型心肌病是一種以左或右心室或雙側(cè)心室進行性擴大，心室收縮功能減退為主要特征的心肌疾病，主要表現(xiàn)為心力衰竭、心律失常、栓塞等，病死率高。其發(fā)生發(fā)展核心的病理過程是心室重塑，心室重塑重要的病理變化是心肌纖維化。中醫(yī)藥對心肌纖維化的治療有獨特的優(yōu)勢，黃芪保心湯是本課題組研制的治療擴張型心肌病的方劑，前期臨床和基礎(chǔ)實驗研究表明黃芪保心湯可以改善擴張型心肌病患者和大鼠心功能及相關(guān)指標。本課題在前期研究基礎(chǔ)上，研究黃芪保心湯對擴張型心肌病大鼠心

2、肌纖維化和TGF-β/smad通路的影響。
　　目的:
　　1.體內(nèi)試驗研究黃芪保心湯對擴張型心肌病大鼠心功能及心肌纖維化的影響，并初步探討對TGF-β/smad通路的影響。
　　2.體外實驗研究黃芪保心湯中有效成分丹酚酸B對心肌成纖維細胞增殖和膠原含量的影響，并初步探討對TGF-β/smad通路的影響。
　　方法:
　　1.體內(nèi)試驗:選取SD大鼠80只，分為兩組:空白對照組和模型組，模型組采用腹腔注射鹽酸

3、多柔比星的方法構(gòu)建擴張型心肌病心衰大鼠模型。心臟彩超篩選出擴張型心肌病心衰造模成功的大鼠，再分為5組:模型組，黃芪保心湯低劑量組;黃芪保心湯中劑量組，黃芪保心湯高劑量組，卡托普利組。給藥4周后再次行心臟彩超測量大鼠左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、左心室射血分數(shù)(LVEF)、左心室短軸縮短率(LVFS)，酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清PICP、PIIINP的含量，蘇木素-伊紅(HE)和馬松(Masson)染色觀察心

4、肌形態(tài)和心肌膠原容積分數(shù)(CVF)，實時熒光定量PCR檢測心肌組織Galectin-3、CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA和免疫組化(IHC)檢測CollogenⅠ、CollogenⅢ，Western blot檢測心肌組織Galectin-3、TGF-β1、smad3蛋白表達的水平。
　　2.體外試驗:采用血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)原代心肌成纖維細胞，共分為空白對照組、血管緊張素Ⅱ組，丹酚酸B低劑量組，丹酚酸B中劑量組，丹酚酸

5、B高劑量組，纈沙坦陽性藥物組。應(yīng)用CCK8法檢測心肌成纖維細胞的增殖情況，免疫熒光法檢測細胞Galectin-3表達，實時熒光定量PCR檢測心肌成纖維細胞CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA和WesternBlot檢測細胞Galectin-3、TGF-β1和smad3蛋白表達的水平。
　　結(jié)果:
　　1.體內(nèi)試驗:大鼠心臟彩超提示黃芪保心湯各劑量組，卡托普利組較模型組LVESD、LVEDD、LVEF、LVFS均有

6、顯著差異(P＜0.05)，血清PICP、PIIINP水平均有降低(P＜0.05)，心肌組織病理學(xué)染色提示黃芪保心湯各劑量組，卡托普利組較模型組心肌纖維化程度減輕，CVF有不同程度降低(P＜0.05)，CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA表達不同程度降低(P＜0.05)，Galectin-3、TGF-β、smad3蛋白表達降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2.體外試驗:丹酚酸B各劑量組，纈沙坦組與模型組比較，細

7、胞增殖率均有所下降，具有顯著差異(P＜0.05)，免疫熒光結(jié)果提示成纖維細胞Galectin-3表達水平均有降低(P＜0.05)，CollogenⅠ、CollogenⅢ mRNA表達不同程度降低(P＜0.05)，Galectin-3、TGF-β、smad3蛋白表達水平降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　黃芪保心湯可以改善擴張型心肌病大鼠心功能及心肌纖維化，其作用機制可能與抑制TGF-β/smad通路有關(guān)。