2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:分離與鑒定肝癌細(xì)胞HepG2中CD133標(biāo)記的肝癌干細(xì)胞;初步探討曲格列酮(Tro)對HepG2及其肝癌干細(xì)胞的細(xì)胞毒性差異。
  方法:利用流式細(xì)胞分選儀分選純化HepG2中的CD133陽性和陰性細(xì)胞,無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)分選后細(xì)胞亞群;通過利用流式細(xì)胞儀和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測分選前后CD133表達(dá)和干性相關(guān)蛋白Oct4和c-Myc的表達(dá);采用懸浮微球形成法,平板克隆形成法和Transwell侵襲和遷移,BALB/

2、c裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)及其腫瘤組織的免疫組化和HE染色,細(xì)胞周期的檢測增殖能力和MTT法測定肝癌干細(xì)胞的耐藥性來共同鑒定肝癌干細(xì)胞;通過CCK8法對比Tro與鹽霉素對CD133肝癌干細(xì)胞毒性情況;全自動生化分析儀測定Tro對細(xì)胞上清AST、ALT、LDH、ALB、BUN、TP生化指標(biāo)的變化,熒光法檢測Tro對CYP酶總活性和ROS水平的影響,Western blot法分析藥物處理后CYP1A2的變化;流式細(xì)胞儀分析Tro處理后的細(xì)胞周期和細(xì)

3、胞凋亡變化來研究Tro顯示的細(xì)胞毒性差異。
  結(jié)果: CD133型腫瘤干細(xì)胞在HepG2中占(0.72±0.05)%,CD133+細(xì)胞分選后純度為98.7%;CD133+細(xì)胞中CD133、c-Myc和Oct4表達(dá)不同程度高于親本細(xì)胞;CD133+細(xì)胞微球形成力,克隆形成力以及Transwell遷移與侵襲能力等明顯高于親本細(xì)胞,且CD133+細(xì)胞腫瘤形成能力顯著升高。同時(shí),CD133+細(xì)胞群大多處于G0/G1期,G2/M期未得到阻

4、滯,并且對索菲替尼表現(xiàn)較大耐藥性;Tro處理12 h,24 h,48 h,72 h后,肝癌干細(xì)胞IC50為(150.52±1.25)μmol/L,(99.08±1.90)μmol/L,(43.96±0.71)μmol/L和(14.81±1.30)μmol/L,顯著低于HepG2,具有明顯量效-關(guān)系,顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;Tro處理48 h時(shí),肝癌干細(xì)胞上清 AST、TP、LDH、ALB、BUN生化指標(biāo)不同程度升高,其中LDH升高水平較親本細(xì)

5、胞高;CYP450總活性和ROS水平出現(xiàn)明顯抑制,CYP1A2抑制程度隨濃度增加。在細(xì)胞凋亡中Tro能夠引起CD133+細(xì)胞發(fā)生早期凋亡和壞死,顯著高于親本細(xì)胞,顯示較大Tro的細(xì)胞毒性差異;在對細(xì)胞周期影響中,Tro能較少GO/G1期細(xì)胞比重,增加S期和G1/M期,顯示較大Tro的細(xì)胞選擇毒性差異。
  結(jié)論:成功篩選和鑒定具有高增殖能力的CD133+HepG2腫瘤干細(xì)胞,在Tro引起肝細(xì)胞毒性方面較HepG2細(xì)胞更為敏感性,顯

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