DYRK1B在子宮內(nèi)膜癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:檢測(cè)Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織和各細(xì)胞系中的表達(dá)，應(yīng)用AZ191（Dyrk1B抑制劑）“降調(diào)”Dyrk1B的表達(dá)后，觀察其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞凋亡率及Dyrk1B蛋白表達(dá)水平的影響，探討Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌中的作用和意義。
　　方法:(1)體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa（高分化）、HEC-1A（中分化）、HEC-1B（中分化）、AN3CA（未分化），采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)不同濃度A

2、Z191（0.5μM，1μM，2.5μM，5μM，10μM，25μM，50μM，100μM）作用48小時(shí)后四種細(xì)胞的增殖能力。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AZ191（0μM，5μM，10μM）作用48小時(shí)后HEC-1A、HEC-1B和AN3CA的細(xì)胞凋亡率。(3)采用蛋白印跡法(Western Blot)檢測(cè)AZ191（0μM，5μM，10μM）作用48小時(shí)后Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B和AN3CA細(xì)胞中Dyrk1B蛋白的表達(dá)。

3、(4)選取2011年1月～2014年9月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科存檔的手術(shù)切除石蠟包埋子宮內(nèi)膜癌組織174例，子宮內(nèi)膜癌前病變組織35例，選擇同期因子宮肌瘤或子宮脫垂行子宮切除術(shù)、且術(shù)后病理證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜組織54例（包括分泌期、增殖期及萎縮期內(nèi)膜）作為對(duì)照組，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)Dyrk1B在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，并分析其與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理因素之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)AZ191作用48小時(shí)后，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生

4、存率均明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)，且AZ191對(duì)子宮內(nèi)膜癌各細(xì)胞系的抑制作用無(wú)差別(P＞0.05)，均呈劑量依賴型。(2) AZ191作用48小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率與對(duì)照組相比均明顯上升，差異有顯著性(P＜0.05)，其中10μM AZ191誘發(fā)受試HEC-1A、HEC-1B和AN3CA三種細(xì)胞系發(fā)生的細(xì)胞凋亡率均上升近2倍。(3) AZ191作用48小時(shí)后，蛋白印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的Dyrk1B蛋白表達(dá)水平均低于對(duì)照組，且

5、呈濃度依賴型。(4)免疫組化檢測(cè)顯示，Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組與子宮內(nèi)膜癌前病變組中均呈高水平表達(dá)，其表達(dá)率分別為73.6％(128/174)，80％(28/35)，兩組間無(wú)差異(P＞0.05)，但兩組分別與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)，也發(fā)現(xiàn)Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度與肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)(P＜0.05)，與病理分型、分期、分級(jí)均無(wú)關(guān)（P均＞0.05）;在血清CA125、CA19-9水平異常升高組中