基于嘌呤堿基電化學(xué)信號(hào)的抗癌藥物篩選方法的研究.pdf

1、目的：研究人乳腺癌（MCF-7）細(xì)胞在黃嘌呤氧化酶（XO）作用前后的電化學(xué)行為，建立酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，然后利用該體系完成環(huán)磷酰胺作用下細(xì)胞中嘌呤堿基代謝變化的測(cè)試，為酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用于抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：以MCF-7細(xì)胞作為細(xì)胞模型，以離子液體與多壁碳納米管復(fù)合修飾電極（MWNTs-IL/GCE）作為工作電極，采用線性掃描伏安法(LSV)研究了嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品和MCF-7細(xì)胞在XO作用前后的電化學(xué)行為，建立

2、了四種嘌呤濃度與信號(hào)強(qiáng)度之間的線性回歸曲線，采用高效液相色譜法對(duì)MCF-7細(xì)胞的電化學(xué)信號(hào)歸屬進(jìn)行了驗(yàn)證，基于此建立酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)；采用酶催化電化學(xué)方法和常規(guī) MTT法對(duì)照研究藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞活性的影響，來(lái)驗(yàn)證酶催化電化學(xué)方法的準(zhǔn)確性與可行性。
　　結(jié)果：原位裂解后的MCF-7細(xì)胞在MWNTs-IL/GCE電極上產(chǎn)生兩個(gè)敏感的電化學(xué)信號(hào)，分別歸屬為黃嘌呤（X）和鳥(niǎo)嘌呤（G）的氧化（0.623 V），以及次黃嘌呤（HX）和

3、腺嘌呤（A）的氧化（0.953 V）；檢測(cè)最佳條件：pH值7.4，50℃恒溫水浴裂解30 min；然后在XO的作用下，X和HX將完全被催化成尿酸（UA）和過(guò)氧化氫（H2O2），剩余信號(hào)分別為G和A，基于原信號(hào)與剩余信號(hào)可以計(jì)算出X和HX的信號(hào)強(qiáng)度，進(jìn)而根據(jù)四種嘌呤濃度與信號(hào)強(qiáng)度之間的線性回歸曲線可以計(jì)算出每種嘌呤的濃度，從而建立了酶催化電化學(xué)檢測(cè)體系；然后利用該體系完成了抗癌藥物篩選實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行給藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過(guò)對(duì)給藥組和對(duì)照組的對(duì)比，明

4、顯的發(fā)現(xiàn)給藥組的電化學(xué)信號(hào)減弱，同時(shí)通過(guò)與MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比，證實(shí)了電化學(xué)方法的準(zhǔn)確性。
　　結(jié)論：采用電化學(xué)法檢測(cè)到MCF-7細(xì)胞有兩個(gè)明顯信號(hào)峰，以這兩個(gè)信號(hào)峰為指標(biāo)，通過(guò)引入黃嘌呤氧化酶建立了酶催化電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，通過(guò)這個(gè)酶催化電化學(xué)檢測(cè)方法，能夠同時(shí)獲得MCF-7細(xì)胞中四種嘌呤堿基濃度。采用酶催化電化學(xué)方法研究藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞活性影響的結(jié)果與常規(guī)MTT法所得到結(jié)果一致，說(shuō)明酶催化電化學(xué)方法可以應(yīng)用到與嘌呤代謝相關(guān)的生