CSE-H2S體系在乳腺癌細(xì)胞中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：內(nèi)源性硫化氫(hydrogen sulfide, H2S)可參與多種系統(tǒng)的生理及病理過(guò)程,并且在部分腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有重要的作用。乳腺癌作為女性的高發(fā)性腫瘤，有關(guān)硫化氫報(bào)道甚少。因此，本文來(lái)探索內(nèi)源性硫化氫在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)作用及其分子機(jī)制。
　　方法：Western blot檢測(cè)人正常乳腺細(xì)胞MCF-10A與兩株乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-l

2、yase,CSE)的表達(dá)；通過(guò)亞甲基藍(lán)法測(cè)定CSE siRNA和CSE抑制劑炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG）對(duì)MCF-7內(nèi)源性硫化氫產(chǎn)生的影響；MTT比色法檢測(cè)CSE siRNA和PAG對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；EdU檢測(cè)法檢測(cè)CSE siRNA和PAG對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CSE siRNA和PAG對(duì)MCF-7細(xì)胞周期及凋亡的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PAG對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響；R

3、T-PCR和Western blot檢測(cè)STAT3 siRNA對(duì)MCF-7細(xì)胞CSE基因表達(dá)的影響；亞甲基藍(lán)法檢測(cè)STAT3 siRNA對(duì)MCF-7細(xì)胞內(nèi)源性硫化氫產(chǎn)生的影響；熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)STAT3對(duì)CSE啟動(dòng)子的激活作用。
　　結(jié)果：
　　1、Western blot結(jié)果顯示,與正常人乳腺細(xì)胞MCF-10A相比，MCF-7細(xì)胞中CSE蛋白呈過(guò)表達(dá)。
　　2、亞甲基藍(lán)法檢測(cè)顯示，CSE siRNA和PAG均抑制

4、MCF-7細(xì)胞內(nèi)源性硫化氫的生成。
　　3、MTT比色法檢測(cè)顯示，CSE siRNA和PAG均抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　4、EdU檢測(cè)顯示，CSE siRNA和PAG均抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。
　　5、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，CSE siRNA和PAG將MCF-7細(xì)胞的周期阻滯在S期。
　　6、劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，PAG可抑制MCF-7細(xì)胞遷移的速率，且呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。
　　7、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，CS

5、E siRNA和PAG對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。
　　8、RT-PCR與Western blot結(jié)果表明，STAT3 siRNA可下調(diào)MCF-7細(xì)胞中CSE mRNA及蛋白水平。
　　9、亞甲基藍(lán)法檢測(cè)顯示，STAT3 siRNA抑制MCF-7細(xì)胞內(nèi)源性硫化氫生成。
　　10、熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)顯示，STAT3可激活CSE的啟動(dòng)子。
　　結(jié)論：
　　1、抑制CSE/H2S體系可抑制人乳腺癌MCF-7