肌動(dòng)蛋白與RNA聚合酶Ⅱ的Rpb5，Rpb6和Rpb7亞基之間的相互作用.pdf

1、肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞骨架的組成部分，讓細(xì)胞流動(dòng)和行使各種生理過(guò)程。肌動(dòng)蛋白是典型真核細(xì)胞中的一種古老而豐富的蛋白質(zhì)，在某些類型的細(xì)胞中約占15％，從細(xì)胞遷移到膜運(yùn)輸?shù)榷计鹬匾淖饔?。曾?jīng)被認(rèn)為只是肌肉的一個(gè)組成部分，目前認(rèn)為真核細(xì)胞中普遍存在的成分。有證據(jù)表明，肌動(dòng)蛋白存在于許多種真核細(xì)胞的細(xì)胞核中，行使多種功能，包括轉(zhuǎn)錄，胞質(zhì)運(yùn)輸，參與染色質(zhì)和核結(jié)構(gòu)的構(gòu)建等。最近的體外研究表明，肌動(dòng)蛋白，與轉(zhuǎn)錄復(fù)合體直接作用，為三個(gè)真核RNA聚合酶所參與

2、的轉(zhuǎn)錄早期所必需。但它的功能目前還不清楚，它的作用仍是一個(gè)有趣的問(wèn)題。 在該領(lǐng)域需要更深入的是研究肌動(dòng)蛋白如何與三種轉(zhuǎn)錄機(jī)器相互作用。這包括所有三個(gè)聚合酶的亞基，許多轉(zhuǎn)錄因子和每個(gè)聚合酶的其他結(jié)合蛋白，這可能有助于確定肌動(dòng)蛋白在每個(gè)事件中真核細(xì)胞演化中，如何與基因轉(zhuǎn)錄復(fù)合體相互作用提供一些基本的見解。 在這項(xiàng)研究中，我們?cè)诖竽c桿菌中構(gòu)建了pcDNA—HA—rpb重組質(zhì)粒，表達(dá)三個(gè)聚合酶Ⅱ亞基：Rpb5，Rpb6和Rpb7

3、，通過(guò)轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞293T，從而表達(dá)帶HA標(biāo)簽的多肽，同時(shí)轉(zhuǎn)染不帶標(biāo)簽的β—actin。在HeLa細(xì)胞中通過(guò)免疫熒光證明了β—肌動(dòng)蛋白與RNA聚合酶Ⅱ亞基共定位。同時(shí)肌動(dòng)蛋白與抗HA的抗體發(fā)生免疫共沉淀，表明二者在體內(nèi)的相互作用。通過(guò)利用在大腸桿菌中表達(dá)和純化的帶谷胱甘肽—S—轉(zhuǎn)移酶（GST）的融合蛋白R(shí)pb5，Rpb6和Rpb7，針對(duì)β—肌動(dòng)蛋白與RNA聚合酶Ⅱ亞基能否進(jìn)行相互作用而作了體外的GST pull—down實(shí)驗(yàn)。然而，