電噴霧質(zhì)譜法研究蛋白質(zhì)亞基之間及蛋白質(zhì)與小分子的相互作用.pdf

1、電噴霧質(zhì)譜法采用軟電離方式,在蛋白質(zhì)的電離過程中能夠使蛋白質(zhì)帶上多個電荷,從而能夠在低質(zhì)量范圍的檢測器中檢測到。同時,電噴霧質(zhì)譜法還具有快速,高靈敏,高特異性的特點,在眾多生物化學研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。因其采用的軟電離方式,能夠在比較溫和的條件下保持生物大分子和復(fù)合物的天然結(jié)構(gòu),從而在非共價鍵復(fù)合物的研究中起著不可替代的作用。
　　在電噴霧質(zhì)譜法中,儀器參數(shù)的設(shè)定很大程度的影響到待測樣品的信號檢測。合適的儀器條件能夠同時保證待測樣

2、品具有足夠強的信號響應(yīng),同時還能保證蛋白質(zhì)及其復(fù)合物的天然構(gòu)型。本課題考察了各個儀器參數(shù)對于乙醇脫氫酶信號的影響。結(jié)果表明,在 ESI-MS檢測過程中,乙醇脫氫酶大多以單體和二聚體形式存在,乙醇脫氫酶多聚體的觀察受流動相中有機溶劑的影響最大。當流動相中乙腈的含量達到30％時,乙醇脫氫酶以二聚體為多,同時能夠觀察到少量的四聚體存在。本文分別選取輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和脫氫酶抑制劑4-甲基嘧啶作為底物與乙醇脫氫酶混合并運用ESI-MS來檢

3、測是否形成非共價鍵復(fù)合物,檢測結(jié)果未觀察到復(fù)合物的形成,說明乙醇脫氫酶與底物的結(jié)合與其天然四聚體的活性結(jié)構(gòu)有關(guān)系。
　　同時,本課題還構(gòu)建了一套利用超濾質(zhì)譜法來快速篩選與生物大分子作用的小分子物質(zhì)的模型。超濾質(zhì)譜法是利用超濾裝置與質(zhì)譜儀器相結(jié)合,能夠在溶液狀態(tài)下高通量的快速的篩選出對復(fù)雜樣品中與特定生物大分子相結(jié)合的小分子物質(zhì)。與其他方法相比,超濾質(zhì)譜法具有快速、靈敏、高通量的特點,對于天然產(chǎn)物中有效成分的篩選和先導藥物開發(fā)具有重

4、要意義。
　　我們將大豆異黃酮粉提取物與人血清白蛋白按照一定比例混合孵育,將未與人血清白蛋白的配體小分子超濾洗去,然后用有機溶劑將與人血清白蛋白結(jié)合的配體小分子洗脫下來,通過建立空白對照組來排除超濾膜的非特異性吸附和操作過程中引起的誤差,最后用 ESI-MS對洗脫下來的小分子進行檢測。實驗結(jié)果表明,超濾質(zhì)譜法能夠很好的篩選出大豆異黃酮粉中大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素等四種與人血清白蛋白具有結(jié)合能力的大豆異黃酮物質(zhì)。此方法利