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文檔簡介
1、本研究以辣椒中椒四號為實驗材料，用常規(guī)壓片法制備辣椒根尖細胞染色體標本。研究了短時間溫度預處理對辣椒根尖細胞有絲分裂活性的影響并比較了不同的預處理劑以及冰水預處理時間對中期分裂相的影響。結果表明，經(jīng)28℃非離體升溫處理3小時，冰水預處理24小時，可以獲得數(shù)目較多、分散均勻的辣椒根尖細胞染色體早中期分裂相。 本研究首先將鹽藻葉綠體型甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(DvgapA)在原核系統(tǒng)中進行了誘導表達。DvgapA的全長cDNA片段
2、被克隆到原核表達載體pTWIN1中，構建成原核融合表達質粒pTWIN1-DvgapA。經(jīng)PCR、酶切以及測序等鑒定后，DvgapA在細菌BL21DE3中進行了誘導表達。SDS-PAGE分析表明，DvgapA在細菌中被成功誘導表達，融合蛋白的大小約為60kD，且在IPTG誘導后4小時表達量最高。 其次，本研究首次鑒定了鹽藻DvgapA基因家族的基因組序列。以DvgapA的全長cDNA作為探針，通過斑點雜交和兩步PCR鑒定的方法，從
3、鹽藻基因組文庫中篩選出甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因目的克隆。經(jīng)PCR和Southern鑒定，共確認10個帶有鹽藻甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因的噬菌體陽性克隆。另外，通過PCR系列篩選的方法，從鹽藻BAC文庫中篩選得到帶有甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因的BAC陽性克隆一個。這些陽性克隆中的甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因片斷，經(jīng)PCR克隆入pMD18-T載體中，并進行了測序分析。結果表明，鹽藻葉綠體型甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因以基因家族的形式存在，根據(jù)
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