耐輻射球菌DNA修復(fù)蛋白的發(fā)現(xiàn)與鑒定.pdf

1、耐輻射球菌是一種革蘭氏陽性、紅色、不運(yùn)動(dòng)的非致病菌.最初是從輻照處理后的肉罐中分離得到的.耐輻射球菌R1菌株全基因組由兩條染色體,一個(gè)大質(zhì)粒和一個(gè)小質(zhì)粒組成.一號(hào)染色體由2,648,638個(gè)堿基對(duì)組成,二號(hào)染色體包含41 2,348個(gè)堿基對(duì),而大質(zhì)粒和小質(zhì)粒分別由1 77,466和45,704個(gè)堿基對(duì)組成.它們共同組成了全基因組3,284,156個(gè)堿基對(duì).耐輻射球菌最突出的特征是極強(qiáng)的抗電離輻射的能力.指數(shù)生長期的R1菌株即使在5kGy

2、劑量的γ-射線照射后,其生長能力也未受影響,6kGy γ-射線照射后染色體基因組產(chǎn)生約200個(gè)的雙鏈斷裂碎片,但是其基因組DNA經(jīng)修復(fù)后沒有引起任何的突變.自該細(xì)菌發(fā)現(xiàn)以來,科學(xué)家們提出各種假設(shè)試圖來解釋這種現(xiàn)象,即使全基因組測(cè)序工作也已經(jīng)完成,但耐輻射球菌真正的抗輻射機(jī)制仍然是個(gè)謎.為了研究耐輻射球菌極強(qiáng)的輻射抗性與DNA修復(fù)機(jī)理,我們應(yīng)用雙向電泳結(jié)合銀染的方法考察了野生型菌株KD8301在γ射線照射前后細(xì)胞體內(nèi)總蛋白組的變化情況.差

3、異蛋白經(jīng)胰蛋白酶酶切后產(chǎn)生肽片段,再利用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜得到肽指紋圖譜來鑒定.這些蛋白行使細(xì)胞的各種功能,絕大部分未曾報(bào)道與輻射抗性有關(guān).在耐輻射球菌全基因組中,大約有一半的基因產(chǎn)物功能尚未清楚.因此,解釋這些功能未知的蛋白可能會(huì)幫助我們更好的理解耐輻射球菌極端輻射抗性機(jī)理.我們的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了一些預(yù)測(cè)的蛋白在電離輻射后,其表達(dá)水平明顯增加或誘導(dǎo),其中對(duì)兩個(gè)基因進(jìn)行了基因敲除.這兩個(gè)基因的破壞子抗電離輻射的能力明顯下