阿維鏈霉菌遺傳多樣性研究和aveD缺失基因的克隆.pdf

1、該論文對阿維鏈霉菌遺傳多樣性和aveD缺失基因的克隆進(jìn)行研究.基于目前國內(nèi)外對阿維菌素的研究現(xiàn)狀,將基因打靶技術(shù)應(yīng)用于對阿維菌素產(chǎn)生菌的基因改造,并對具體的實驗條件進(jìn)行了初步的摸索,為敲除阿維鏈霉菌aveD基因,進(jìn)一步遺傳改造阿維鏈霉菌,構(gòu)建高產(chǎn)工程菌,提高阿維菌素有效成分的產(chǎn)出奠定了技術(shù)基礎(chǔ).實驗的第一部分是對阿維鏈霉菌突變株遺傳多樣性的研究.選用22株經(jīng)離子束、亞硝基胍和太空搭載誘變篩選出的阿維菌素高產(chǎn)突變株與野生菌及出發(fā)菌株,采用

2、了PCR技術(shù)擴(kuò)增rpsL基因,用TGGE技術(shù)對擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析,對它們進(jìn)行了遺傳多樣性分析.研究結(jié)果表明,14株菌與野生菌株4.1253對比都發(fā)生了突變,說明阿維菌素產(chǎn)量與rpsL基因突變有相關(guān)性.該實驗的第二部分在阿維鏈霉菌aveD缺失基因的克隆研究中,采用開讀框內(nèi)(ORF)定點缺失技術(shù),根據(jù)基因庫中aveD基因上下游序列,設(shè)計了PCR擴(kuò)增引物,摸索擴(kuò)增條件,將純化的aveD基因與pMD18-T連接轉(zhuǎn)化E.coliDH5α,提取重組質(zhì)