法醫(yī)DNA分析若干問題的研究.pdf

1、1.目的:對6個短串聯(lián)重復(fù)序列(ShortTandemRepeats，STR)基因座在成都漢族群體中的遺傳多態(tài)性及其種屬特異性進行研究，探討其在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用價值，并為法醫(yī)DNA分型提供新的候選STR遺傳標記。 方法:用Chelex法從110名成都漢族無血緣關(guān)系個體的新鮮血以及14種常見動物組織中提取DNA。從GDB數(shù)據(jù)庫中查出6個四核苷酸重復(fù)序列D4S2366、D4S2367、D6S474、D6S1281、D2S1396和D2

2、0S601，按數(shù)據(jù)庫提供的序列合成引物，經(jīng)PCR擴增、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和硝酸銀染色技術(shù)檢測，對110名成都漢族無血緣關(guān)系個體的6個STR基因座進行DNA分型，應(yīng)用POWERSTATS軟件對分型結(jié)果進行統(tǒng)計分析，獲得各基因座基因頻率及法醫(yī)遺傳多態(tài)性數(shù)據(jù)。應(yīng)用所合成的引物對14種常見動物DNA進行PCR擴增和電泳檢測，對6個STR基因座的種屬特異性進行研究。 結(jié)論:在成都漢族群體中D4S2366、D6S474、D6S1281

3、和D20S601基因座可作為法醫(yī)學(xué)個人識別和親子鑒定新的候選遺傳標記，D2S1396和D4S2367基因座應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)時鑒定能力較差；D20S601有較好的種屬特異性，在法醫(yī)學(xué)研究中具有較大的應(yīng)用價值，其余5個短串聯(lián)重復(fù)序列種屬特異性較差。 2.目的:建立有效的毛發(fā)線粒體DNA(mitochondrialDNA，mtDNA)高變區(qū)Ⅰ(hypervariableregionⅠ，HVⅠ)異質(zhì)性DHPLC分析(DenaturingHi

4、ghPerformanceLiquidChromatography，DHPLC)的方法。 方法:從四川大學(xué)大學(xué)生群體中收集10名無血緣關(guān)系個體的頭發(fā)和唾液拭子樣本，酚-氯仿法提取mtDNA。根據(jù)PCR擴增片段的位置，把mtDNA的HVⅠ區(qū)分為兩個基因座，分別稱為HVIA和HVIB基因座。對兩個基因座進行PCR擴增，并優(yōu)化反應(yīng)條件。熒光標記末端終止法測定陽性對照Y1樣本PCR擴增產(chǎn)物的mtDNA序列。應(yīng)用非變性聚丙烯酰胺凝膠垂直電

5、泳、硝酸銀染色技術(shù)檢測10名個體HVIA和HVIB基因座的PCR擴增產(chǎn)物。在HVIA基因座，對Y1和Y2樣本的mtDNA進行PCR擴增；在HVIB基因座，對Y1和Y3樣本的mtDNA進行PCR擴增，PCR擴增產(chǎn)物分別以兩種比例混合，共形成4個mtDNA池。用DHPLC方法檢測所有的mtDNA樣本池和10名個體的樣本，建立mtDNA異質(zhì)性DHPLC分析的方法。 結(jié)論:本課題成功建立了毛發(fā)mtDNA異質(zhì)性DHPLC分析方法，該方法有