番紅花（Crocus sativus）八氫番茄紅素脫氫酶CsPDS基因的克隆、表達(dá)及含西紅花甙資源植物的研究.pdf

1、番紅花(Crocus sativus L.)系鳶尾科(Iridaceae)番紅花屬(Crocus)球莖類(lèi)草本植物.由于富含的類(lèi)胡蘿卜素使其具有鮮亮的顏色、特殊的香味,因而被用作食品添加劑、天然色素、香料和染料外;番紅花也是一種珍稀名貴中藥材,具有抑制肝炎病毒、增強(qiáng)免疫、治療或預(yù)防心腦血管疾患和抗癌的功效.其中主要的活性成分是西紅花甙,需經(jīng)類(lèi)胡蘿卡素代謝途徑合成,而八氫番茄紅素脫氫酶(Phytoene desaturase)是此途徑中的一

2、個(gè)早期關(guān)鍵酶.從資源開(kāi)發(fā)角度出發(fā),該文根據(jù)薄層層析、紫外可見(jiàn)光光度檢測(cè)法研究了密蒙花中西紅花甙的提取方法,同時(shí)采用RP-HPLC法建立了密蒙花黃色色素提取物中西紅花甙-1含量的測(cè)定方法.色譜條件為色譜柱:Spherisorb-C18柱5um,250mm×4.6mm);流動(dòng)相:甲醇-乙睛-水,檢測(cè)波長(zhǎng):437nm.加樣回收率在99％以上,RSD小于1％.該法適用于密蒙花中西紅花甙-1的含量測(cè)定.以密蒙花芽、幼葉、莖段為外植體,在B5、MS

3、、White培養(yǎng)基上獲得愈傷組織.以幼葉誘導(dǎo)為佳,并篩選出愈傷組織最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L;最佳繼代培養(yǎng)基為B5+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L;分化培養(yǎng)基為B5+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+GA 0.1mg/L;生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.2mg/L或1/2MS+NAA 0.6mg/L.幼苗移栽后成活率達(dá)100％,并于當(dāng)年開(kāi)花.同時(shí)建立了以密蒙花幼

4、芽獲得快繁苗的最佳培養(yǎng)基組合,其中不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為B5+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+GA 0.1mg/L;不定芽增殖培養(yǎng)基為B5+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L和B5+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L;生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2mg/L或1.2MS+NAA 0.6mg/L.利用RAPD技術(shù)和5S-rRNA基因序列間隔序列分析為基礎(chǔ)的DNA分子鑒定方法,獲得了用于鑒定密蒙花及其混淆