西紅花玉米黃質(zhì)裂解酶基因轉(zhuǎn)化番茄的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以浙雜905、圣亞和富丹為材料，對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。主要結(jié)果如下： 1不同的種子消毒方式、種子培養(yǎng)基和番茄種子在培養(yǎng)基的不同放置方式是影響番茄種子萌發(fā)的主要因素。其中采用處理C(用70％的酒精消毒1 min.，然后用2％的次氯酸鈉消毒10min.，無(wú)菌水沖洗3～5次)進(jìn)行消毒，然后將番茄種子插入到培養(yǎng)基Ⅱ(1/2 MSBs+1％蔗糖+0.6％瓊脂pH5.8)上時(shí)，有利于番茄種子的萌發(fā)，并且富丹種

2、子的發(fā)芽率83.33％高于浙雜905種子的發(fā)芽率80.67％和圣亞種子的發(fā)芽率82.00％。 2以番茄子葉為外植體的最佳再生培養(yǎng)基配比為(MSB5+3％蔗糖+0.6％瓊脂+BA2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO32.0 mg/L+ Vc100mg/L pH5.8)，浙雜905、圣亞、富丹子葉的出愈率分別為92.67％、95.67％、93.33％；以番茄莖段為外植體的最佳再生培養(yǎng)基配比為(MSB5+3％蔗糖+0

3、.6％瓊脂+BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+AgNO33.0 mg/L+Vc100mg/L pH5.8)浙雜905、圣亞、富丹莖段的出愈率分別為79.33％、81.33％、87.00％。 3番茄葉片外植體比莖段外植體對(duì)卡那霉素敏感，番茄子葉的適宜篩選濃度為50mg·L-1，番茄莖段的適宜篩選濃度為60mg·L-1；當(dāng)頭孢霉素濃度為500 mg·L-1時(shí)，可有效抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)。 4影響番茄子葉轉(zhuǎn)化率的因素，

4、依次是苗齡>預(yù)培養(yǎng)>菌液濃度>共培養(yǎng)>侵染時(shí)間。五種因子的最佳水平組合配比為苗齡8-9d、預(yù)培養(yǎng)2d、菌液濃度(OD600=0.6)、共培養(yǎng)3d、侵染時(shí)間20min.。影響番茄莖段轉(zhuǎn)化率的因素，依次是預(yù)培養(yǎng)>菌液濃度>苗齡>共培養(yǎng)>侵染時(shí)間。五種因子的最佳水平組合配比為預(yù)培養(yǎng)3d、菌液濃度(OD600=0.6)、苗齡4-5d、共培養(yǎng)4d、侵染時(shí)間15min.。 5對(duì)再生植株經(jīng)PCR檢測(cè)證明CsZCD基因已成功整合到浙雜905和圣