異黃酮合成酶基因無標記轉(zhuǎn)化番茄的研究.pdf

1、目前,因為轉(zhuǎn)化效率的問題,大多數(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化操作需要使用選擇標記基因,諸如抗生素或除草劑抗性基因等來篩選轉(zhuǎn)化子,雖然仍無直接研究結(jié)果表明選擇標記基因影響人類健康或環(huán)境安全,但近年來人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔心卻與日俱增,為了消除轉(zhuǎn)基因食品的安全性顧慮,無選擇標記轉(zhuǎn)基因植物應運而生。 本文初步對Cre/lox重組系統(tǒng)進行了研究,并用已構(gòu)建好的能有效刪除標記基因的Cre/loxp組成型載體利用農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化煙草,獲得了共轉(zhuǎn)化煙草植株

2、；植物異黃酮是一類具有增強植物抗病、誘導根瘤形成以及預防激素相關(guān)腫瘤發(fā)生、緩解女性更年期綜合癥的活性次生代謝產(chǎn)物,其合成關(guān)鍵酶是異黃酮合酶(IFS);本研究為了改良加工番茄的品質(zhì)特性,使人們在食用加工番茄產(chǎn)品的同時獲得更好的保健效果,對加工番茄遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系進行了優(yōu)化,構(gòu)建了含有IFS基因的植物表達載體pBI121-ifs,并用根癌農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化加工番茄子葉且獲得了轉(zhuǎn)基因植株；果樹由于自身的特點,使得遺傳轉(zhuǎn)化有很大的難度和特殊性。所

3、以本文以草莓和蘋果為試材,建立了適用于草莓和蘋果轉(zhuǎn)基因的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。 本研究的主要結(jié)論如下： 1.本試驗對獲得的22株共轉(zhuǎn)化煙草葉片提取DNA進行PCR檢測,結(jié)果證明有10株成功刪除了gus基因,刪除率為45.5％； 2.農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化加工番茄時篩選出的最適宜培養(yǎng)基：預培養(yǎng)培養(yǎng)基是MS+B5+IAA 1.0mg/L+6-BA2.0mg/L,篩選轉(zhuǎn)化苗培養(yǎng)基為MS+B5+IAA 1.0mg/L+6-BA2.0

4、mg/L+Cef500mg/L+Kan50mg/L,轉(zhuǎn)化苗生根培養(yǎng)基為1/2MS+B5+IBA2.0mg/L+Cef300mg/L+Kan50mg/L,對獲得的11株轉(zhuǎn)化加工番茄提取DNA和RNA進行PCR和RT-PCR檢測,結(jié)果證明有4株已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入了ifS基因,轉(zhuǎn)化效率為36.4％； 3.草莓離體再生體系建立中篩選的最佳培養(yǎng)基：莖尖快繁培養(yǎng)基1/2MS+B5+NAA0.5mg/L十TDZ0.5mg/L,不定芽誘導培養(yǎng)基MS+