蒙古黃芪異黃酮合成酶基因的克隆及序列分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、異黃酮是一類植物次生代謝物質,具有獨特的保健功能及防治多種疾病的作用.隨著分子生物學和次生代謝工程研究的深入,異黃酮的合成代謝途徑已經(jīng)比較清楚,而且已經(jīng)從大豆(Glycine max)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)、豌豆(Pisum sativum)等植物上分離了一些異黃酮合成代謝途徑的關鍵酶基因.異黃酮合成酶是苯丙氨酸分枝代謝途徑—異黃酮代謝途徑的關鍵酶.為了進一步對異黃酮合成酶基因進行研究,該研究采用cDNA末端快速擴增

2、(Rapid Amplification ofcDNA ends,RACE)技術,首次從中國特有的藥用植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var. Mongholicus(Bge.)Hsiao)種子發(fā)芽的根中分離克隆得到一個新的異黃酮合成酶基因,對該基因進行了序列分析和功能預測,為今后研究該基因的功能、分子進化及次生代謝工程等奠定了基礎.具體的實驗結果如下:用還原型谷胱甘肽處理蒙古黃芪根

3、部,誘導異黃酮合成酶基因表達,提取總RNA.采用同源克隆方法,首先利用RT-PCR技術得到了673bp的序列;再通過RACE技術獲得長度為1,995bp的異黃酮合成酶基因,并命名為mhifs.mhifs包含一個完整的開放閱讀框(1,578bp),編碼525個氨基酸,推導肽鏈的分子量約為60kDa.經(jīng)同源查找,通過相關的生物信息學分析,在核苷酸水平上,蒙古黃芪異黃酮合成酶基因全長cDNA序列與大豆、鷹嘴豆、豌豆、刺甘草(Glycyrrhi

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