巨龍竹蔗糖合成酶和鈣調(diào)蛋白基因的片段克隆及分析.pdf

1、云南省西南部特產(chǎn)的珍稀竹種巨龍竹(Dendrocalamus sinicus)，是世界上稈型最為高大的竹種，其稈高可達(dá)30m以上，徑粗可達(dá)30 cm以上。其單位面積產(chǎn)材量比毛竹高5～8倍，是我國(guó)南部熱帶及世界熱帶至南亞熱帶地區(qū)推廣前景最為廣闊的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)竹種之一。竹筍出土后120天就可以長(zhǎng)到35多米高，生物量增加很大。因此，克隆與其生長(zhǎng)相關(guān)的基因，對(duì)于研究巨龍竹速生機(jī)理及其優(yōu)良基因的利用具有重要的意義。
　　 鈣調(diào)蛋白CAM(Ca

2、lmodulin)是生物細(xì)胞內(nèi)一種重要的調(diào)控蛋白，通過其與靶酶的相互作用控制細(xì)胞正常的生長(zhǎng)發(fā)育及細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境變化的反應(yīng)。蔗糖合成酶SuSy(Sucrose Synthase)在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中有著舉足輕重的作用。葉片光合產(chǎn)物向“庫(kù)”器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)是蔗糖，而蔗糖合成酶是蔗糖進(jìn)入各種代謝途徑所必需的關(guān)鍵酶之一。
　　 本文首先根據(jù)已知蔗糖合成酶基因SuSy保守區(qū)域設(shè)計(jì)兼并引物，采用RT-PCR方法克隆獲得巨龍竹生長(zhǎng)相關(guān)基因蔗

3、糖合成酶SuSy的保守區(qū)域片段SUS，并用生物信息學(xué)的方法進(jìn)行序列分析。
　　 同時(shí)根據(jù)已知鈣調(diào)蛋白CAM基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)兼并引物，采用RT-PCR方法從巨龍竹葉片RNA中擴(kuò)增了鈣調(diào)蛋白CAM基因的保守區(qū)域片段(CAM260和CAM354)，對(duì)所獲得的片段進(jìn)行序列分析。
　　 結(jié)果如下：
　　 1)本研究獲得了巨龍竹蔗糖合成酶基因SuSy保守區(qū)域片段序列SUS，其長(zhǎng)度為618bp。BLAST分析表明，該保守區(qū)域片

4、段與已知蔗糖合成酶基因高度同源，可以初步認(rèn)為其為巨龍竹蔗糖合成酶基因SuSy的保守區(qū)域片段。
　　 2)獲得巨龍竹鈣調(diào)蛋白基因CAM保守序列(CAM260和CAM354)。長(zhǎng)度分別為260bp和354bp。BLAST分析表明，CAM260的核苷酸序列并沒有與其它植物的CAM基因在同一組中，而在粳稻染色體(Oryza sativa L.ssp.japonica)的序列中，相似性達(dá)84％以上。CAM354片段并未找到與其相似的基因。