查爾酮合成酶等黃酮代謝基因的克隆及短葶飛蓬遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、藥用植物短葶飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.是提取燈盞花素的主要原料來源，由于大量采挖使野生資源遭到了嚴(yán)重破壞，目前燈盞花藥材主產(chǎn)地云南省已開展了人工種植的嘗試，但在大規(guī)模種植中存在種苗繁殖慢、種質(zhì)退化等問題。本研究首先利用短葶飛蓬種子消毒后在MSo培養(yǎng)基發(fā)芽壯苗建立了快速育苗方法，育苗時間縮短到40～50d。再通過葉柄離體培養(yǎng)經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)不定芽建立起了一個有效的植株再生體系?？蛇M(jìn)一步應(yīng)用

2、于生物技術(shù)對短葶飛蓬實施品質(zhì)改良的研究。本文對短葶飛蓬中活性成分燈盞乙素(黃酮苷)的生物合成途徑進(jìn)行了假設(shè)，選取了其中四個相關(guān)代謝酶來研究它們在燈盞乙素生物合成中的作用。同時，利用RACEPCR技術(shù)從短葶飛蓬葉中首次克隆出了查耳酮合成酶基因(Ebchs)。對該基因及其推導(dǎo)氨基酸序列與菊科其他物種進(jìn)行比對分析表明它們具有較高的同源性。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化程序中，通過試驗確定了潮霉素篩選的濃度為10mg/L，菌液侵染時間不超過10min，共培