長春花重要生物堿含量測定及相關基因的表達分析.pdf

1、生物堿是植物天然次生代謝產物中數量最多的一類含氮堿性化合物。許多生物堿由于具有特殊的藥理學活性已引起人們越來越多的關注。藥用植物長春花中含有長春堿、長春新堿等重要的抗腫瘤萜類吲哚生物堿（TIAs）。但這些TIAs在天然長春花植株中含量較低，化學結構復雜使其人工合成十分困難，因此，僅從天然長春花植物中提取TIAs不能滿足市場需求，其價格較為昂貴。近年來，關于長春花生物堿代謝途徑的研究取得了很多成果，為利用植物基因工程提高長春花中藥用生物堿

2、的含量提供了理論依據。本研究利用RP-HPLC技術對采集到的25個長春花品種葉片中的文多靈、長春質堿和長春堿含量進行了測定，并分析了3種生物堿含量之間的關系，為長春花生物堿代謝工程提供了材料選擇的依據。另外通過反轉錄PCR技術研究了tdc，g10h，str，dat4個長春花生物堿代謝途徑中的重要基因在長春花品種間的表達差異，分析了基因表達水平與生物堿含量的關系。主要研究內容如下： ⑴優(yōu)化改進了RP-HPLC測定長春花中生物堿含量

3、的方法，能一次完成長春花中3種的重要生物堿（文多靈，長春質堿和長春堿）的測定。 ⑵獲得了25個長春花品種中的文多靈、長春質堿和長春堿含量的數據，分析了長春堿含量與文多靈、長春質堿含量的關系。結果表明，文多靈含量與長春堿含量的相關性比長春質堿含量與長春堿含量的相關性更好。 ⑶通過RT-PCR檢測了長春花生物堿代謝途徑中4個關鍵基因的表達水平，分析比較了基因表達與TIAs含量之間的關系。得出了香葉醇10-脫羧酶基因g10h，