真蘚科絲瓜蘚屬Pohlia和大葉蘚屬Rhodobryum系統(tǒng)位置的RAPD分析.pdf

1、真蘚科Bryaceae植物的分子系統(tǒng)學(xué)研究是蘚類植物研究中的新熱點，RAPD是分子系統(tǒng)學(xué)研究中被廣泛采用的一項重要技術(shù)。在真蘚科Bryaceae中，絲瓜蘚屬Pohlia的位置、大葉蘚屬Rhodobryum屬的地位和真蘚科Bryaceae內(nèi)幾個屬的系統(tǒng)排列關(guān)系一直存在爭議。為了對上述問題進行探討，本研究建立了真蘚科Bryaceae植物RAPD的反應(yīng)體系，構(gòu)建了真蘚科Bryaceae植物RAPD圖譜，并利用RAPD圖譜對真蘚科Bryacea

2、e植物進行了系統(tǒng)發(fā)育分析。 通過比較DNA提取方法，本研究選擇快速提取試劑盒成功提取所有標本基因組DNA，所提DNA完整性好，純度高，能夠滿足RAPD的要求。通過單因素和正交試驗對影響RAPD的因素進行考查，建立了優(yōu)化的RAPD反應(yīng)體系：dNTP為0.2mmol/L，隨機引物0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶1.25U，Mg<'2+>為2mmol/L，模板DNA為50ng，擴增體系為25μl。擴增程序為：95℃預(yù)變性7mi

3、n，然后94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40個循環(huán)，72℃終延伸7min。以優(yōu)化出來的PCR條件和PCR體系以標本Y1、Y2、Y3所提DNA為模板對250條引物進行篩選擴增，35條擴增穩(wěn)定、富有多態(tài)性的引物被篩選出來。 采用上述35條引物對40份標本所提DNA進行擴增，最終采用26條引物構(gòu)建RAPD圖譜，共擴增出198條穩(wěn)定的條帶，分子量在200bp～5,000bp之間，平均擴增條帶7.61條，其中1

4、81條為多態(tài)性條帶，占91.41％。表明該圖譜能夠反映出所研究類群的遺傳多態(tài)性，可以作為系統(tǒng)發(fā)育分析的依據(jù)。 采集RAPD多態(tài)性信息，運用系統(tǒng)進化分析軟件PAUP4.0b8分別采用MP法、NJ法、UPGMA法對多態(tài)性信息進行分析，構(gòu)建了MP、NJ、UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹。所揭示的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與傳統(tǒng)劃分并不一致，部分結(jié)果支持基于分子序列的研究結(jié)果。 系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果顯示：絲瓜蘚屬Pohlia更接近于提燈蘚科Mniaceae

5、而遠離真蘚科Bryaceae的類群，支持Cox等分子序列證據(jù)將絲瓜蘚屬Pohlia放在提燈蘚科Mniaceae的安排；大葉蘚屬Rhodobryum與真蘚屬Bryum作為姊妹群存在，不支持Ochi將其作為真蘚屬Bryum內(nèi)一個亞屬的安排。真蘚科Bryaceae和真蘚屬Bryum均為多系群，認為傳統(tǒng)分類對一些類群的劃分存在爭議?？梢奟APD可以為真蘚科Bryaceae植物的系統(tǒng)發(fā)育研究提供分子證據(jù)，真蘚科Bryaceae植物的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系有