利用MRJPs VNTR分子標記研究中蜂亞家系及蜜蜂屬內(nèi)的分子進化.pdf

1、蜂王漿(Royal jelly,簡稱RJ)是哺育蜂分泌的供蜂王和三日齡以內(nèi)的蜜蜂幼蟲食用的漿狀物質(zhì),它對蜜蜂的級型分化起決定作用。蜂王漿主要由工蜂頭部的咽下腺和上顎腺合成、分泌。蜂王漿的化學(xué)成分因季節(jié)和區(qū)域的不同而有所不同,蛋白質(zhì)是蜂王漿的最主要組分,約占王漿干物質(zhì)的50％,王漿蛋白由水溶性蛋白(WSPs)和非水溶性蛋白組成。其中水溶性蛋白占總蛋白含量的46％～89％,為王漿蛋白的主要部分,稱為MRJPs(Maior Royal Jel

2、ly Proteins)。至今為止,在西方蜜蜂(Aapis mellifera)中已發(fā)現(xiàn)MRJPs蛋白家族共有8個成員AmMRJP1-8,它們的基因序列已完成全部測序,為同一基因家族。在東方蜜蜂(Apis cerana)中,MRJP2、MRJP3和MRJP5的cDNA序列C-端均存在明顯的串聯(lián)重復(fù)序列長度多態(tài)性(VNTR),而西方蜜蜂MRJP2基因cDNA序列C-端沒有發(fā)現(xiàn)VNTR結(jié)構(gòu),只有MRJP3和MRJP5的cDNA序列C-端存在

3、明顯的VNTR結(jié)構(gòu)。
　　 利用中蜂MRJP2、3、5三個基因的cDNA序列C-端的VNTR結(jié)構(gòu)特點,分別設(shè)計三對PCR引物,通過PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳,產(chǎn)生容易分辨的、多態(tài)性高的DNA片段,采用BioImaging systems of LabworksTM Image AcquisiTiO2 andAnalysis Softerware(Version4.0)分析軟件對多態(tài)片段進行分析判讀,獲得中蜂個體的VNTR分子標記

4、信息,根據(jù)VNTR分子標記鑒定蜂群中的不同亞家系。本研究對同一中蜂蜂群的45只工蜂進行三個VNRT基因位點的檢測,結(jié)果表明,用單一的AccMRJP2、3和5的VNTR分子標記分別從45只工蜂中鑒定出6、10和12個亞家系,用這三個基因位點聯(lián)合鑒定,可以從45個個體中鑒定到37個亞家系。這是首次利用分子標記研究中華蜜蜂蜂群內(nèi)的亞家系。
　　 在我國境內(nèi)分布的蜜蜂屬(Apis)下的種主要包括東方蜜蜂、西方蜜蜂、大蜜蜂(Apis do

5、rsata)、小蜜蜂(Apis florea)、黑大蜜蜂(Apis laboriosa)和黑小蜜蜂(Apis andreniformis)六個種,但至今還未見到利用分子生物學(xué)的手段來研究我國境內(nèi)這六個蜂種之間的親緣關(guān)系的報道。序列分析表明在東方蜜蜂的MRJP2 cDNA序列的C-端存在明顯的重復(fù)序列長度多態(tài)性,而西方蜜蜂在此基因位點無明顯的重復(fù)序列長度多態(tài)性。蜂、小蜜蜂、黑大蜜蜂和黑小蜜蜂這六個種的MRJP2基因的C-端重復(fù)序列,對這六