利用分子標(biāo)記評(píng)估中國對(duì)蝦放流效果研究.pdf

1、中國對(duì)蝦是一種大型的經(jīng)濟(jì)蝦類,主要分布于我國黃渤海海域及朝鮮半島西海岸,同時(shí)是我國重要的漁業(yè)資源之一。但是由于受到過度捕撈、水域污染、工程建設(shè)等諸多人為因素的影響,到上世紀(jì)80年代初中國對(duì)蝦野生資源已嚴(yán)重衰退。漁業(yè)資源增殖在修復(fù)水域生態(tài)環(huán)境和恢復(fù)漁業(yè)資源等方面的工作中是較為常用并有效的手段。20世紀(jì)80年代初我國開始了中國對(duì)蝦的增殖和放流工作,并取得了很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。但是長期以來,受傳統(tǒng)放流標(biāo)志的限制,對(duì)中國對(duì)蝦增殖放流效果一

2、直缺少一種可以精確評(píng)估的手段和方法。本文以分子標(biāo)記為手段,探討了一種中國對(duì)蝦資源增殖放流效果評(píng)估的新方法,即利用特定中國對(duì)蝦家系個(gè)體摻入到放流群體中,形成“內(nèi)標(biāo)”,回捕后利用微衛(wèi)星標(biāo)記結(jié)合家系父母本識(shí)別“內(nèi)標(biāo)”個(gè)體,據(jù)其數(shù)量推算放流量,從而實(shí)現(xiàn)放流回捕率效果評(píng)估的目的。以期為中國對(duì)蝦增殖放流的有效評(píng)估提供科學(xué)依據(jù),研究結(jié)果報(bào)道如下:
　　微衛(wèi)星分子標(biāo)記符合孟德爾遺傳規(guī)律,且為共顯性遺傳標(biāo)記,因此本文以自主開發(fā)的中國對(duì)蝦微衛(wèi)星序列中

3、,篩選出多態(tài)性豐富的FCKR002、FCKR005、FCKR007、FCKR009和FCKR013位點(diǎn),結(jié)合已公開的EN0033、RS0622和RS1101三個(gè)位點(diǎn),按照其退火溫度的不同,組成兩組四重 PCR反應(yīng)體系,分別命名為高溫組和低溫組。組內(nèi)引物分別標(biāo)以6-FAM、VIC、NED和PET熒光標(biāo)記,通過ABI3130基因分析儀自動(dòng)檢測(cè)個(gè)體的基因型。通過條件優(yōu)化建立了兩組微衛(wèi)星四重PCR反應(yīng)體系,通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該兩組 PCR反應(yīng)體系均可

4、以較好的擴(kuò)增出微衛(wèi)星位點(diǎn)遺傳信息,可以精確的進(jìn)行個(gè)體的基因分型。
　　在隨機(jī)抽取200個(gè)中國對(duì)蝦個(gè)體中,利用優(yōu)化后的兩個(gè)四重 PCR反應(yīng)體系共8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn),評(píng)估該兩個(gè)體系用于個(gè)體/家系的識(shí)別能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨機(jī)抽取的中國對(duì)蝦遺傳多樣性檢測(cè)顯示,8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在200個(gè)個(gè)體中共獲得225個(gè)等位基因,平均28.13個(gè),平均 PIC值0.8939。在雙親基因型均未知、單親已知和雙親已知這三種情況下,兩組四重 PCR反應(yīng)體系結(jié)合使用的累

5、積排除概率均達(dá)到99.99％以上水平,單獨(dú)使用的累積排除概率也可以達(dá)到95%以上。
　　在模擬放流的1786尾中國對(duì)蝦中,使用低溫組反應(yīng)體系檢測(cè)基因型,利用Cervus軟件結(jié)合父母本信息,檢測(cè)分子識(shí)別檢測(cè)結(jié)果為191/300,三個(gè)家系的識(shí)別結(jié)果為35/100、64/100和92/100;結(jié)合物理 VIE熒光標(biāo)志佐證的識(shí)別檢測(cè)結(jié)果為186/300,三個(gè)家系的識(shí)別結(jié)果為34/100、60/100和92/100。分子標(biāo)記的檢出率要大于物

6、理標(biāo)記的檢出率,對(duì)此我們?cè)倮酶邷亟M檢測(cè)以增加其排除概率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)并不能排除多檢出的個(gè)體分屬正確的各家系。因此從一定程度上說明了分子標(biāo)志較物理標(biāo)志的優(yōu)越性。
　　此外,本研究還對(duì)模擬放流中投放的個(gè)體和混合背景群體進(jìn)行了遺傳結(jié)構(gòu)上的分析以及“內(nèi)標(biāo)”個(gè)體在投放數(shù)量的比例進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)在標(biāo)志個(gè)體摻入前后,一個(gè)世代上的期望雜合度并沒有顯著性差異(p>0.05);在進(jìn)行增殖放流過程中,“內(nèi)標(biāo)”家系的選擇是比較重要的,應(yīng)選擇與放流群體各種指