凡納濱對蝦引進群體分子系譜構(gòu)建及中國對蝦分子標志家系放流效果評估.pdf

1、凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）又稱南美白對蝦，是我國對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的主要養(yǎng)殖品種，原產(chǎn)中南美洲太平洋沿岸水域。凡納濱對蝦的選擇育種工作已經(jīng)在過去的數(shù)十年中展開?；邶嫶蟮酿B(yǎng)殖規(guī)模，親蝦需求量較大。若采用養(yǎng)殖的對蝦作為親本，會產(chǎn)生嚴重的近親繁殖，導致重要性狀的衰退，需要從不同的公司引進更多的群體來擴大親本數(shù)量。但是從國外引進親蝦的系譜不清，造成親緣關(guān)系未知，因此急需對引進群體進行詳細的遺傳多樣性和遺傳分化分析。

2、>　　中國對蝦（Fenneropenaeus chinensis）主要分布于我國北方沿海及朝鮮半島西海岸，是我國重要海水養(yǎng)殖蝦類。由于過度捕撈、環(huán)境污染以及管理不善等諸多人為因素的影響，中國對蝦野生資源量萎縮嚴重。漁業(yè)增殖放流可以有效恢復漁業(yè)資源，現(xiàn)已應(yīng)用在多個水產(chǎn)經(jīng)濟物種中。由于種種原因，尤其是受限于回捕漁獲中增殖放流與野生個體數(shù)量的精確估算，現(xiàn)有增殖放流效果評估方法一直未能對中國對蝦放流回捕率作出理想的評估。利用攜帶特定微衛(wèi)星分子指

3、紋圖譜的中國對蝦家系，作為“內(nèi)標”按照一定比例摻入到放流群體中，在回捕漁獲中，通過特定“內(nèi)標”家系個體識別及家系溯源從而準確推算放流回捕率，實現(xiàn)對放流回捕率的精確計算。
　　本研究的目的在于：1）凡納濱對蝦引進群體分子親緣關(guān)系計算及系譜重建；2）分子標志家系對中國對蝦資源增殖放流效果評估在膠州灣及渤海灣（漢沽）的試點。具體研究結(jié)果報道如下：
　　利用7對微衛(wèi)星引物評估7個凡納濱對蝦引進群體共192尾個體的遺傳多樣性和遺傳分化

4、水平。結(jié)果表明，7對引物共獲得的等位基因109個，分別從4～21個不等，有效等位基因數(shù)為2.7～14.6；各位點的平均觀測雜合度(Ho)為0.318～0.949，平均期望雜合度（He）為0.636～0.956；平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.593～0.952，說明各位點在7個凡納濱對蝦引進群體內(nèi)均表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性水平。49個群體位點中的37出現(xiàn)了不同程度的Hardy-Weinberg平衡偏離。對7個群體間的遺傳分化水平進行檢測，

5、得到近交系數(shù)Fis在5個多態(tài)位點均為正值，兩兩群體間的固定指數(shù)Fst值在0.0225～0.1510之間。Fst顯著性檢驗表明，各群體之間的遺傳分化不顯著。分子方差分析（AMOVA）結(jié)果顯示，大部分遺傳變異(88.7％)來自于群體內(nèi)，來自于群體間個體內(nèi)的遺傳變異(11.3%)較小。群體間遺傳相似性系數(shù)、遺傳距離及聚類分析表明，UA1和UA2親緣關(guān)系最近。7個引進群體具有豐富的遺傳多樣性和中度的遺傳分化，適合作為大規(guī)模家系育種的基礎(chǔ)群體。<

6、br>　　在增殖放流回捕的中國對蝦漁獲中，膠州灣海域共回捕2507尾，渤海灣（漢沽）海域共回捕3232尾。利用實驗室已經(jīng)開發(fā)的兩組中國對蝦熒光標記微衛(wèi)星四重PCR反應(yīng)體系（按照最佳退火溫度，分別命名為高溫組和低溫組），檢測回捕個體基因型，結(jié)合Cervus3.0軟件和父母本基因型信息，對回捕個體進行分子識別。首先利用低溫組四重PCR反應(yīng)體系對膠州灣回捕個體進行分型，確定回捕“內(nèi)標”個體，再利用高溫組四重PCR反應(yīng)體系對回捕“內(nèi)標”個體進行

7、確認。最終在膠州灣2507尾回捕樣品中，檢測到來自于4個家系的8尾個體。渤海灣（漢沽）海域的回捕個體采用相似的方法，但先用高溫組四重PCR反應(yīng)體系檢測，再利用低溫組進行確認。最終，在渤海灣3232尾回捕樣品中，檢測到來自于3個家系的4尾個體。結(jié)合兩地2012年度的中國對蝦放流數(shù)量，推算膠州灣2507尾回捕樣品中，增殖放流個體數(shù)量為2400尾，野生個體數(shù)量為107尾；推算渤海灣（漢沽）3232尾回捕樣品中，增殖放流個體數(shù)量為3137尾，野